| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 英文缩略词一览表 | 第14-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 滋养层细胞在胎盘中的作用及GTCs的体外培养概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 山羊早期胎盘发育结构特征及重要性 | 第15页 |
| 1.1.2 滋养层细胞对早期胎盘的决定性作用 | 第15-16页 |
| 1.1.3 山羊胎盘滋养层细胞体外培养概述 | 第16-17页 |
| 1.2 TET1蛋白及其对早期胎盘发育的调控作用 | 第17-21页 |
| 1.2.1 TET蛋白种类及结构特征 | 第17-18页 |
| 1.2.2 由TET蛋白介导的5mC连续氧化还原反应 | 第18-19页 |
| 1.2.3 TET1对哺乳动物发育的调控作用 | 第19-21页 |
| 1.3 Wnt信号通路及其在早期胚胎发育中的调控作用 | 第21-27页 |
| 1.3.1 Wnt信号通路调控机理 | 第22-24页 |
| 1.3.2 Wnt信号通路在早期胎盘发育中的调控作用 | 第24-27页 |
| 第2章 引言 | 第27-29页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第27页 |
| 2.2 技术路线 | 第27-29页 |
| 第3章 材料与方法 | 第29-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 3.1.1 实验动物和样品采集 | 第29页 |
| 3.1.2 主要药品及试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 3.2.1 GTCs的培养 | 第31-33页 |
| 3.2.2 Dox诱导处理 | 第33-34页 |
| 3.2.3 TET1干扰处理 | 第34-36页 |
| 3.2.4 mRNA相对表达量检测 | 第36-39页 |
| 3.2.5 免疫细胞化学(ICC) | 第39页 |
| 3.2.6 划痕试验 | 第39-40页 |
| 3.2.7 MTS试验 | 第40页 |
| 3.2.8 数据统计分析 | 第40-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-59页 |
| 4.1 GTCs的体外分离及培养 | 第41-42页 |
| 4.1.1 GTCs的生长及形态观察 | 第41页 |
| 4.1.2 滋养层细胞的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2 细胞总RNA提取质量检测 | 第42页 |
| 4.3 Dox诱导对TET1基因表达及Wnt通路相关分子的影响 | 第42-49页 |
| 4.3.1 Dox诱导浓度的筛选 | 第42-45页 |
| 4.3.2 TET1过表达对GTCs迁移能力的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.3 TET1过表达对GTCs整体5mC与5hmC水平的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.4 TET1过表达对Wnt通路相关分子的影响 | 第47-49页 |
| 4.4 干扰TET1表达对Wnt信号通路相关分子的影响 | 第49-59页 |
| 4.4.1 靶向山羊TET1基因的shRNA重组表达质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4.2 TET1shRNA质粒转染效果检测 | 第50页 |
| 4.4.3 TET1shRNA干扰靶点筛选 | 第50-52页 |
| 4.4.4 TET1恢复性试验 | 第52页 |
| 4.4.5 干扰TET1表达对GTCs迁移能力的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.6 干扰TET1表达对GTCs整体5mC与5hmC水平的影响 | 第53-55页 |
| 4.4.7 干扰TET1表达对Wnt通路相关分子的影响 | 第55-59页 |
| 第5章 讨论 | 第59-65页 |
| 5.1 影响GTCs体外培养的因素 | 第59-60页 |
| 5.1.1 胎龄 | 第59页 |
| 5.1.2 分离培养方法 | 第59-60页 |
| 5.2 TET1表达的调控 | 第60-61页 |
| 5.2.1 Dox诱导 | 第60-61页 |
| 5.2.2 piLenti-shTET1-GFP质粒转染 | 第61页 |
| 5.3 TET1对GTCs活性及迁移能力的影响 | 第61-62页 |
| 5.4 TET1对GTCs整体5mC和5hmC水平的影响 | 第62-63页 |
| 5.5 GTCs中TET1对Wnt信号通路相关分子的影响 | 第63-65页 |
| 5.5.1 GTCs中TET1对Wnt通路上游拮抗剂基因转录的影响 | 第63页 |
| 5.5.2 TET1基因对Wnt通路部分相关基因的影响 | 第63-65页 |
| 第6章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 在学期间发表的文章 | 第79页 |
