| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统概述 | 第13页 |
| 1.2 APOBEC基因家族概述 | 第13-14页 |
| 1.3 四种碱基编辑系统 | 第14-16页 |
| 1.3.1 碱基编辑系统BE(baseeditor) | 第14-15页 |
| 1.3.2 碱基编辑系统Target-AID | 第15页 |
| 1.3.3 碱基编辑系统TAM（targeted AID-mediated mutagenesis） | 第15-16页 |
| 1.3.4 碱基编辑系统CRISPR-X | 第16页 |
| 1.4 碱基编辑系统BE发展历程 | 第16-20页 |
| 1.4.1碱基编辑系统BE1,BE2,BE3 | 第16-18页 |
| 1.4.2 扩增BE3打靶位点 | 第18页 |
| 1.4.3 增强BE3编辑特异性 | 第18页 |
| 1.4.4 优化BE3保真性 | 第18-19页 |
| 1.4.5 提高碱基编辑产物单一性 | 第19-20页 |
| 1.5 各类碱基编辑系统在基础研究中广泛应用 | 第20-21页 |
| 1.5.1 BE应用于精准治疗的基础研究 | 第20页 |
| 1.5.2 BE应用于作物遗传改良 | 第20-21页 |
| 1.5.3 BE应用于动物模型构建 | 第21页 |
| 1.6 CRISPR系统在家蚕中的应用 | 第21-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| 2.1 研究背景、目的及意义 | 第23-24页 |
| 2.2 研究内容 | 第24页 |
| 2.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 家蚕碱基编辑系统BE3的建立 | 第25-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.3 主要溶液试剂配置 | 第26-27页 |
| 3.2 实验主要仪器 | 第27页 |
| 3.3 实验方法 | 第27-35页 |
| 3.3.1 gRNA载体构建 | 第27-31页 |
| 3.3.2 puc57-hsp70-BE3表达载体构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 细胞转染 | 第32页 |
| 3.3.4 细胞基因组提取 | 第32页 |
| 3.3.5 检测碱基编辑产物 | 第32-35页 |
| 3.3.6 检测BE3在家蚕中的编辑范围 | 第35页 |
| 3.4 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.4.1 puc57-hsp70-BE3表达载体构建 | 第35-36页 |
| 3.4.2 BE3蛋白表达 | 第36-37页 |
| 3.4.3 gRNA表达载体构建 | 第37-38页 |
| 3.4.4 BE3介导的家蚕基因组碱基编辑 | 第38-39页 |
| 3.4.5 探究BE3在家蚕中的编辑范围 | 第39-40页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第40-43页 |
| 第四章 家蚕BE3敲除体系的建立 | 第43-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.2 主要实验仪器 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-48页 |
| 4.3.1 gRNA表达载体构建 | 第43-44页 |
| 4.3.2 超纯质粒提取 | 第44-45页 |
| 4.3.3 细胞转染,基因提取及靶位点附近基因组序列扩增 | 第45页 |
| 4.3.4 流式细胞仪筛选 | 第45页 |
| 4.3.5 WesternBlot检测目的基因蛋白水平变化 | 第45-48页 |
| 4.3.6 T7E1核酸内切酶检测靶位点突变 | 第48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-55页 |
| 4.4.1 BE3介导的红色荧光基因mCherry敲除 | 第48-51页 |
| 4.4.2 BE3介导的外源基因Puromycin敲除 | 第51-52页 |
| 4.4.3 BE3介导的内源基因BmGAPDH和BmV-ATPaseB敲除 | 第52-54页 |
| 4.4.4 家蚕全基因组BE3敲除靶位点预测 | 第54-55页 |
| 4.5 总结与讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 BE3多位点编辑研究 | 第57-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第57页 |
| 5.2 主要实验仪器 | 第57-58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-59页 |
| 5.3.1 细胞铺板 | 第58页 |
| 5.3.2 细胞转染 | 第58页 |
| 5.3.3 细胞基因组提取 | 第58页 |
| 5.3.4 靶位点附近基因组序列扩增 | 第58-59页 |
| 5.4 实验结果 | 第59-61页 |
| 5.4.1 BE3介导的多碱基突变 | 第59-60页 |
| 5.4.2 BE3介导碱基编辑所产生indel频率 | 第60-61页 |
| 5.5 总结与讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 综合与讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 硕士期间发表论文 | 第73页 |
