| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 文中的缩略词 | 第12-17页 |
| 1 前言 | 第17-27页 |
| 1.1 杆状病毒的简介 | 第17-21页 |
| 1.1.1 杆状病毒的结构 | 第17-18页 |
| 1.1.2 杆状病毒的感染 | 第18-19页 |
| 1.1.3 杆状病毒的基因表达 | 第19页 |
| 1.1.4 杆状病毒的基因组 | 第19-21页 |
| 1.2 杆状病毒的蛋白质 | 第21-24页 |
| 1.2.1 多角体相关蛋白 | 第21-22页 |
| 1.2.2 病毒核衣壳蛋白 | 第22-23页 |
| 1.2.3 病毒的囊膜蛋白 | 第23页 |
| 1.2.4 杆状病毒的非结构蛋白 | 第23-24页 |
| 1.3 杆状病毒与宿主的相互作用 | 第24-25页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 2 实验材料和工具 | 第27-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-34页 |
| 2.1.1 病毒株及所用质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株及细胞、实验昆虫 | 第27页 |
| 2.1.3 培养基及配方 | 第27-28页 |
| 2.1.4 分子量标准,试剂盒和工具酶 | 第28页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第28-29页 |
| 2.1.6 化学试剂及配方 | 第29页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第29-31页 |
| 2.1.8 原有bacmids和质粒 | 第31页 |
| 2.1.9 构建的重组质粒及重组病毒 | 第31-34页 |
| 3 实验方法和步骤 | 第34-47页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第34页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的片段 | 第34-35页 |
| 3.1.3 DNA片段的回收 | 第35页 |
| 3.1.4 酶切片段和载体 | 第35页 |
| 3.1.5 回收片段和载体 | 第35页 |
| 3.1.6 酶连转化 | 第35-36页 |
| 3.1.7 质粒提取及验证 | 第36页 |
| 3.2 酵母双杂交 | 第36-40页 |
| 3.2.1 诱饵蛋白筛选cDNA文库 | 第36-37页 |
| 3.2.2 两次划线筛选阳性克隆 | 第37页 |
| 3.2.3 酵母菌落PCR | 第37-38页 |
| 3.2.4 X-Gal显色 | 第38页 |
| 3.2.5 酵母质粒提取及PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.2.6 大肠杆菌DH5a感受态的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.7 酵母质粒转化DH5a感受态细胞 | 第39页 |
| 3.2.8 大肠杆菌质粒提取及PCR鉴定 | 第39页 |
| 3.2.9 测序及序列分析 | 第39-40页 |
| 3.3 回交验证 | 第40-41页 |
| 3.3.1 LiAc法制备酵母AH109和Y187感受态细胞 | 第40页 |
| 3.3.2 大肠杆菌质粒转化酵母AH109感受态细胞 | 第40-41页 |
| 3.3.3 回交及显色 | 第41页 |
| 3.4 5'RACE获得基因全长 | 第41-44页 |
| 3.4.1 Sf9细胞系总RNA提取 | 第41-42页 |
| 3.4.2 5'RACE克隆 | 第42页 |
| 3.4.3 合成RACE-ready cDNA | 第42-43页 |
| 3.4.4 RACE巢式PCR | 第43-44页 |
| 3.5 重组病毒感染甜菜夜蛾幼虫 | 第44-46页 |
| 3.5.1 转染High5细胞 | 第44-45页 |
| 3.5.2 转染后细胞的收获 | 第45页 |
| 3.5.3 对甜菜夜蛾幼虫的饲喂处理 | 第45页 |
| 3.5.4 对甜菜夜蛾幼虫的注射处理 | 第45页 |
| 3.5.5 血淋巴观察 | 第45-46页 |
| 3.6 共聚焦显微镜分析 | 第46-47页 |
| 4 实验结果 | 第47-61页 |
| 4.1 AC132互作蛋白基因的酵母双杂交筛查 | 第47-49页 |
| 4.2 草地贪夜蛾白三烯A4水解酶同源物编码序列校验 | 第49-51页 |
| 4.3 AC132与四种宿主蛋白相互作用位点的识别 | 第51-55页 |
| 4.4 AC132与另外几种病毒蛋白的亚细胞共定位分析 | 第55-60页 |
| 4.4.1 AC132与E18、E25、VP39、39K和IE1的亚细胞共定位分析 | 第55-57页 |
| 4.4.2 AC132缺失对E18,VP39和39K亚细胞定位的影响 | 第57-60页 |
| 4.5 ac132缺失突变体ODV丧失口服感染能力 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
