| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-21页 |
| 1.1 本课题的研究目的与意义 | 第14页 |
| 1.2 动物孵化酶研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 水生生物孵化酶研究进展 | 第15页 |
| 1.2.2 鸟类及昆虫孵化酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 家蚕转基因研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.1 家蚕转基因所用载体及启动子 | 第16-18页 |
| 1.3.2 家蚕转基因所用报告基因 | 第18页 |
| 1.3.3 家蚕转基因所用的基因导入方法 | 第18页 |
| 1.3.4 家蚕转基因的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 蓖麻蚕的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 本文主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 蓖麻蚕孵化酶基因（PcrHE）的克隆与特性分析 | 第21-43页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第21-34页 |
| 2.1.1 材料及试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 常用缓冲液与试剂配制方法 | 第21-23页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第23页 |
| 2.1.4 生物信息学软件 | 第23-24页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第24页 |
| 2.1.6 蓖麻蚕卵和各组织总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.1.7 PcrHE第一链cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.1.8 PCR克隆PcrHE部分片段 | 第25-26页 |
| 2.1.9 琼脂糖凝胶的制备与电泳 | 第26-27页 |
| 2.1.10 目的片段的凝胶回收 | 第27页 |
| 2.1.11 目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第27页 |
| 2.1.12 感受态细胞制备 | 第27-28页 |
| 2.1.13 质粒DNA的转化 | 第28页 |
| 2.1.14 单克隆的挑取 | 第28页 |
| 2.1.15 碱裂解法提取少量质粒DNA | 第28-29页 |
| 2.1.16 重组质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| 2.1.17 制备甘油菌与测序 | 第29页 |
| 2.1.18 PcrHE 3′端序列的克隆 | 第29-31页 |
| 2.1.19 PcrHE 5′端序列的克隆 | 第31-33页 |
| 2.1.20 生物信息学分析 | 第33页 |
| 2.1.21 PcrHE在蓖麻蚕卵催青期胚胎不同发育阶段的半定量RT-PCR分析 | 第33-34页 |
| 2.1.22 PcrHE在幼虫不同组织中的表达谱 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-41页 |
| 2.2.1 PcrHE cDNA部分序列克隆 | 第34页 |
| 2.2.2 PcrHE cDNA全长的克隆 | 第34-35页 |
| 2.2.3 同源比对与进化分析 | 第35-38页 |
| 2.2.4 PcrHE蛋白的三维结构 | 第38-39页 |
| 2.2.5 卵催青期胚胎发育不同阶段PcrHE转录水平的变化 | 第39-40页 |
| 2.2.6 幼虫不同组织中PcrHE表达谱 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第3章 PcrHE的原核表达 | 第43-52页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第43-48页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 常用试剂及缓冲液配制 | 第43-44页 |
| 3.1.3 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 | 第44-46页 |
| 3.1.4 原核表达重组载体的构建 | 第46页 |
| 3.1.5 PcrHE蛋白的原核表达 | 第46页 |
| 3.1.6 SDS-PAGE电泳 | 第46-47页 |
| 3.1.7 Western Blot | 第47-48页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第48-50页 |
| 3.2.1 成熟酶对应核苷酸序列、去信号肽对应核苷酸序列与ORF对应核苷酸序列的克隆 | 第48页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.3 重组蛋白的原核表达与Western Blot | 第49-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 转基因载体的构建 | 第52-59页 |
| 4.1 实验材料和方法 | 第52-54页 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 | 第52页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第52-53页 |
| 4.1.3 家蚕基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 4.1.4 启动子BmHEⅠp、BmHEⅡp的克隆 | 第53页 |
| 4.1.5 PcrHE片段的克隆 | 第53-54页 |
| 4.1.6 转基因载体质粒的构建 | 第54页 |
| 4.2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.2.1 启动子BmHEⅠp和BmHEⅡp的克隆 | 第54页 |
| 4.2.2 目的基因PcrHE的克隆 | 第54-55页 |
| 4.2.3 转基因载体的构建 | 第55-57页 |
| 4.3 讨论 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
