| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| 1.1 立题依据和意义 | 第13-15页 |
| 1.2 鱼类免疫系统组成 | 第15-18页 |
| 1.2.1 鱼类免疫组织和器官 | 第16-17页 |
| 1.2.2 鱼类免疫细胞的种类 | 第17-18页 |
| 1.3 鱼类免疫机制研究进展 | 第18-22页 |
| 1.3.1 鱼类先天性免疫防御机制 | 第19页 |
| 1.3.2 细胞因子 | 第19-21页 |
| 1.3.3 呼吸爆发(respiratory burst) | 第21页 |
| 1.3.4 巨噬细胞增殖 | 第21-22页 |
| 1.4 离子通道概述 | 第22-33页 |
| 1.4.1 离子通道的分类 | 第25-26页 |
| 1.4.2 钾离子通道 | 第26-33页 |
| 1.5 花鲈(Lateolabrax japonicus) | 第33-35页 |
| 2 鲈鱼不同类型钾离子通道基因的克隆 | 第35-71页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-45页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第36页 |
| 2.1.3 电压门控型钾离子通道(Kv)基因PCR引物设计 | 第36-37页 |
| 2.1.4 总RNA的提取 | 第37页 |
| 2.1.5 逆转录合成cDNA | 第37页 |
| 2.1.6 PCR反应预实验 | 第37-38页 |
| 2.1.7 PCR扩增鲈鱼Kv基因的cDNA序列 | 第38-40页 |
| 2.1.8 试剂盒回收PCR扩增片段 | 第40页 |
| 2.1.9 PCR扩增片段T-A克隆入载体和序列测定 | 第40-41页 |
| 2.1.10 用CaCl2制备感受态细胞 | 第41页 |
| 2.1.11 感受态细胞的转化 | 第41页 |
| 2.1.12 PCR检测含阳性克隆的转化菌落 | 第41页 |
| 2.1.13 鲈鱼Kv基因的RACE | 第41-44页 |
| 2.1.14 测序结果验证 | 第44页 |
| 2.1.15 系统进化树和进化距离 | 第44-45页 |
| 2.1.16 生物信息学分析 | 第45页 |
| 2.2 实验结果 | 第45-67页 |
| 2.2.1 鲈鱼不同类型Kv序列全长 | 第45-56页 |
| 2.2.2 鲈鱼Kv的系统进化树及同源相似性分析 | 第56-61页 |
| 2.2.3 鲈鱼Kv的结构预测 | 第61-67页 |
| 2.3 讨论 | 第67-69页 |
| 2.4 小结 | 第69-71页 |
| 3 不同类型的钾离子通道在鲈鱼各组织的表达 | 第71-84页 |
| 3.1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第71页 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 | 第71-72页 |
| 3.1.3 RT-PCR和Real-Time PCR引物的设计 | 第72页 |
| 3.1.4 鲈鱼样本的处理及总RNA的提取 | 第72-73页 |
| 3.1.5 不同组织中spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2基因的扩增和半定量 | 第73页 |
| 3.1.6 Real-time PCR反应条件及反应体系的优化 | 第73-74页 |
| 3.1.7 Real-time PCR重复性和特异性实验 | 第74页 |
| 3.1.8 Real-time PCR扩增效率比对实验 | 第74页 |
| 3.1.9 实验数据的输出与分析 | 第74-75页 |
| 3.2 实验结果 | 第75-80页 |
| 3.2.1 定量引物设计结果 | 第75页 |
| 3.2.2 不同组织中spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2基因的扩增和半定量 | 第75-76页 |
| 3.2.3 Real-time PCR重复性和特异性实验 | 第76-78页 |
| 3.2.4 扩增效率比对 | 第78-79页 |
| 3.2.5 受感染鲈鱼不同组织spKv1.1、spKv3.1、spKv1.5、spKv1.2 mRNA的相对表达量 | 第79-80页 |
| 3.3 讨论 | 第80-84页 |
| 4 不同类型钾离子通道基因在鲈鱼巨噬细胞中的表达分析 | 第84-99页 |
| 4.1 材料与方法 | 第84-90页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第84页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第84-86页 |
| 4.1.3 鲈鱼巨噬细胞分离和培养 | 第86-87页 |
| 4.1.4 电压门控型钾离子通道(Kv)基因表达引物设计 | 第87-88页 |
| 4.1.5 鲈鱼巨噬细胞RNA的提取 | 第88页 |
| 4.1.6 鲈鱼巨噬细胞的收集 | 第88-89页 |
| 4.1.7 Real-time PCR检测鲈鱼Kv的表达 | 第89-90页 |
| 4.2 实验结果 | 第90-96页 |
| 4.2.1 鲈鱼巨噬细胞培养 | 第90-91页 |
| 4.2.2 PCR反应预实验 | 第91-92页 |
| 4.2.3 Real-time PCR扩增鲈鱼Kv基因 | 第92-94页 |
| 4.2.4 鲈鱼巨噬细胞Kv基因的表达 | 第94-96页 |
| 4.3 讨论 | 第96-98页 |
| 4.4 小结 | 第98-99页 |
| 5 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞免疫功能的影响 | 第99-113页 |
| 5.1 材料与方法 | 第99-103页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第99页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第99-101页 |
| 5.1.3 鲈鱼巨噬细胞的收集 | 第101页 |
| 5.1.4 Real-time PCR分析鲈鱼巨噬细胞因子基因的表达 | 第101-102页 |
| 5.1.5 鲈鱼巨噬细胞增殖测定 | 第102页 |
| 5.1.6 鲈鱼巨噬细胞呼吸爆发活性的测定 | 第102-103页 |
| 5.2 实验结果 | 第103-109页 |
| 5.2.1 Real-time PCR扩增鲈鱼细胞因子基因 | 第103-105页 |
| 5.2.2 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞中细胞因子基因的表达的影响 | 第105-106页 |
| 5.2.3 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞增殖的影响 | 第106-108页 |
| 5.2.4 钾离子通道阻断剂对鲈鱼巨噬细胞呼吸爆发活性的影响 | 第108-109页 |
| 5.3 讨论 | 第109-112页 |
| 5.4 小结 | 第112-113页 |
| 6 本论文的创新点 | 第113-114页 |
| 7 参考文献 | 第114-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 个人简历 | 第126页 |
| 发表的学术论文 | 第126页 |
