| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 插图和附表清单 | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 古菌的发现及分类 | 第11-12页 |
| 1.2 古菌研究进展及其展望 | 第12页 |
| 1.3 目的菌株及性状 | 第12-13页 |
| 1.4 古嘌苷的生物合成 | 第13页 |
| 1.5 古嘌苷生物合成的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.6 腈类 | 第15页 |
| 1.7 腈类生物还原的研究进展及其意义 | 第15-16页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 试验材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 底物 | 第17页 |
| 2.1.3 质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要试剂与试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.6 引物 | 第20页 |
| 2.1.7 培养基 | 第20页 |
| 2.1.8 主要溶液 | 第20-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-34页 |
| 2.2.1 目的基因queF-like来源 | 第22页 |
| 2.2.2 PCR扩增目的基因(queF-like)片段 | 第22-23页 |
| 2.2.3 回收PCR产物 | 第23页 |
| 2.2.4 目的基因与载体连接 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组质粒pET-30Xa/LIC-QueF-L的转化、提取、酶切鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.6 重组质粒pET-30Xa/LIC-QueF-L的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 queF-like基因的诱导表达 | 第27-31页 |
| 2.2.8 QueF-like腈类还原酶活性分析 | 第31-34页 |
| 3 试验结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 queF-like基因的克隆 | 第34-38页 |
| 3.1.1 PCR扩增目的基因(queF-like)片段 | 第34页 |
| 3.1.2 回收PCR产物 | 第34-35页 |
| 3.1.3 重组质粒的转化、提取、酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.4 重组质粒pET-30Xa/LIC-QueF-L的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2 queF-like基因的诱导表达 | 第38-41页 |
| 3.2.1 重组表达质粒转化到BL21(DE3)的转化结果 | 第38-39页 |
| 3.2.2 QueF-like初步诱导表达结果 | 第39页 |
| 3.2.3 QueF-like的Ni-NTA纯化和超滤浓缩 | 第39-41页 |
| 3.3 纯化蛋白质浓度的测定 | 第41页 |
| 3.3.1 蛋白质标准曲线绘制 | 第41页 |
| 3.3.2 纯化蛋白QueF-like浓度测定 | 第41页 |
| 3.4 QueF-like腈类还原酶活性分析 | 第41-44页 |
| 3.4.1 光谱扫描分析 | 第41-42页 |
| 3.4.2 高效液相色谱(HPLC)分析 | 第42-44页 |
| 3.5 QueF-like蛋白结构预测 | 第44-50页 |
| 4 结论与讨论 | 第50-55页 |
| 4.1 结论 | 第50页 |
| 4.2 讨论 | 第50-55页 |
| 4.2.1 载体构建方法的选择 | 第50-51页 |
| 4.2.2 底物的选择 | 第51-52页 |
| 4.2.3 QueF-like的腈类还原活性的工业应用 | 第52-53页 |
| 4.2.4 脒基转移酶活性的研究 | 第53页 |
| 4.2.5 QueF-like生物信息学的预测 | 第53-54页 |
| 4.2.6 泉古菌中古嘌苷的生物合成途径的多样性 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
