| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 被子植物雄配子体的结构和发育过程 | 第13-15页 |
| 1.1.1 花粉的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 花粉的发育 | 第14页 |
| 1.1.3 多聚糖与花粉壁发育 | 第14-15页 |
| 1.2 花粉与雌蕊组织的相互作用 | 第15-19页 |
| 1.2.1 花粉的黏附、水合和萌发 | 第15-16页 |
| 1.2.2 花粉管与柱头的相互作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 花粉管的生长 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 花粉管生长的胞吐作用 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 花粉管生长的内吞作用 | 第19页 |
| 1.3 网格蛋白依赖的内吞途径 | 第19-22页 |
| 1.3.1 网格蛋白依赖的内吞过程中的衔接蛋白 | 第20-22页 |
| 1.3.2 极性运输调控花粉管细胞壁的建成 | 第22页 |
| 1.4 植物果胶甲酯酶PME | 第22-25页 |
| 1.4.1 果胶甲酯酶的结构 | 第23-24页 |
| 1.4.2 PME活性的调控 | 第24-25页 |
| 1.4.3 PME调控花粉管的生长 | 第25页 |
| 1.5 果胶甲酯酶抑制因子PMEI | 第25-26页 |
| 1.6 钾离子通道蛋白 | 第26页 |
| 1.7 本实验的目的与意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 实验材料及其培养环境 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.3.1 酶类 | 第27-28页 |
| 2.1.3.2 基本生化药剂 | 第28页 |
| 2.1.3.3 各种缓冲液及培养基配方 | 第28-29页 |
| 2.1.4 实验中所使用的引物名称及序列 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 转基因表达载体的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.1.1 PCR引物设计 | 第30页 |
| 2.2.1.2 利用PCR技术扩增目的片段 | 第30页 |
| 2.2.1.3 PCR产物的电泳检测及回收 | 第30-31页 |
| 2.2.1.4 目的片段与克隆载体的连接 | 第31页 |
| 2.2.1.5 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.1.6 热激法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| 2.2.1.7 大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.2.1.8 质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.1.9 质粒DNA的酶切验证 | 第33页 |
| 2.2.1.10 酶切片段的回收 | 第33页 |
| 2.2.1.11 目的DNA片段与载体DNA片段的连接 | 第33页 |
| 2.2.2 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.3 实验材料拟南芥的种植和转化 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 拟南芥的种植 | 第34页 |
| 2.2.3.2 农杆菌转化拟南芥 | 第34-35页 |
| 2.2.4 植物总DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.5 植物总RNA的提取及反转录 | 第35-36页 |
| 2.2.6 Real-timePCR分析 | 第36页 |
| 2.2.7 GUS染色 | 第36页 |
| 2.2.8 亚历山大花粉活力染色 | 第36页 |
| 2.2.9 体内萌发及苯胺蓝染色 | 第36页 |
| 2.2.10 花粉纤维素及果胶质染色 | 第36-37页 |
| 2.2.11 花粉萌发实验 | 第37页 |
| 2.2.12 体内诱导萌发实验 | 第37页 |
| 2.2.13 酵母双杂交实验 | 第37-38页 |
| 2.2.14 Pull-down实验 | 第38-40页 |
| 2.2.14.1 目的蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 2.2.14.2 目的蛋白的纯化(His标签为例) | 第38-39页 |
| 2.2.14.3 Pull-down分析 | 第39页 |
| 2.2.14.4 WesternBlot检测 | 第39-40页 |
| 2.2.15 CRISPR/Cas9突变体的构建 | 第40页 |
| 2.2.16 AritificialmiRNA突变体的构建 | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-55页 |
| 3.1 DG1在花粉中的表达及定位 | 第42-43页 |
| 3.2 DG1新突变体的创造 | 第43-44页 |
| 3.2.1 dg1-3突变体的创造 | 第43-44页 |
| 3.2.2 dg1-3/+中DG1和BGD的表达水平分析 | 第44页 |
| 3.3 dg1-3/+突变体花粉的表型分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 dg1-3/+突变体花粉发育及萌发异常 | 第44-45页 |
| 3.3.2 dg1-3/+突变体花粉活力异常 | 第45页 |
| 3.3.3 dg1-3/+突变体花粉胼胝质积累异常 | 第45-46页 |
| 3.3.4 dg1-3/+突变体花粉纤维素和果胶质积累异常 | 第46-47页 |
| 3.4 dg1-3/+突变体的互补 | 第47-48页 |
| 3.5 pER8::amiRNA-DG1转基因植株表型观察 | 第48-50页 |
| 3.6 DG1互作蛋白的筛选和验证 | 第50-52页 |
| 3.7 DG1通过识别SPIK中Y-I-L-V序列与之结合 | 第52-53页 |
| 3.8 PME亚细胞定位 | 第53页 |
| 3.9 pme突变体花粉表型分析 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
