| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词(Abbrevation) | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 AIV概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 AIV结构和功能 | 第14-15页 |
| 1.1.2 HA结构与功能 | 第15-16页 |
| 1.2 H9亚型AIV | 第16-18页 |
| 1.2.1 H9亚型AIV形态结构 | 第16页 |
| 1.2.2 H9N2亚型AIV流行情况 | 第16-17页 |
| 1.2.3 H9N2亚型AIV的种间传播 | 第17页 |
| 1.2.4 H9N2亚型AIV的分子特性 | 第17-18页 |
| 1.3 流感病毒的诊断方法 | 第18-19页 |
| 1.4 单抗的研究与发展 | 第19-20页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 2 H9亚型AIV单抗制备及鉴定 | 第22-32页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 材料及设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验用试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 抗原制备 | 第24页 |
| 2.2.2 免疫BALB/c小鼠 | 第24页 |
| 2.2.3 细胞融合 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 SP2/0瘤细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.3.2 免疫脾细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.3.3 饲养细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.3.4 细胞融合 | 第25页 |
| 2.2.4 阳性瘤细胞的筛选 | 第25页 |
| 2.2.5 阳性瘤细胞的克隆 | 第25页 |
| 2.2.6 单抗的鉴定方法 | 第25-27页 |
| 2.2.6.1 杂交瘤细胞染色体计数 | 第25页 |
| 2.2.6.2 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第25页 |
| 2.2.6.3 单克隆抗体生产 | 第25-26页 |
| 2.2.6.4 腹水中单克隆抗体HI效价的测定 | 第26页 |
| 2.2.6.5 特异性检测 | 第26页 |
| 2.2.6.6 病毒TCID_(50)测定 | 第26页 |
| 2.2.6.7 间接免疫荧光检测 | 第26页 |
| 2.2.6.8 杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第26页 |
| 2.2.6.9 单克隆抗体稳定性鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-31页 |
| 2.3.1 克隆后结果 | 第27页 |
| 2.3.2 阳性瘤细胞染色体计数 | 第27-28页 |
| 2.3.3 亚类鉴定及染色体数目 | 第28页 |
| 2.3.4 单抗血凝抑制效价 | 第28-29页 |
| 2.3.5 检测单抗特异性 | 第29-30页 |
| 2.3.6 阳性瘤细胞IFA检测 | 第30页 |
| 2.3.7 阳性瘤细胞稳定性结果 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 3 H9亚型AIV双抗体夹心ELISA方法的建立及应用 | 第32-43页 |
| 3.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 生物材料 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| 3.1.3.1 单克纯化和标记用溶液 | 第32-33页 |
| 3.1.3.2 试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 单抗腹水纯化 | 第34页 |
| 3.2.2 抗体浓度及效价的测定 | 第34页 |
| 3.2.3 HRP标记单抗 | 第34页 |
| 3.2.4 H9亚型AIV ELISA方法建立 | 第34-36页 |
| 3.2.4.1 双抗体夹心ELISA方法步骤 | 第34页 |
| 3.2.4.2 包被抗体和酶标抗体配对的选择 | 第34页 |
| 3.2.4.3 棋盘滴定法确定抗体浓度 | 第34-35页 |
| 3.2.4.4 确定临界值 | 第35页 |
| 3.2.4.5 选择封闭液 | 第35页 |
| 3.2.4.6 选择温育时间 | 第35页 |
| 3.2.4.7 特异性试验 | 第35页 |
| 3.2.4.8 敏感性实验 | 第35页 |
| 3.2.4.9 临床试验 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1 单克隆抗体的提纯及检测 | 第36-37页 |
| 3.3.2 确包被抗体和酶标抗体最佳配对 | 第37-38页 |
| 3.3.3 棋盘滴定法确定抗体浓度 | 第38页 |
| 3.3.4 确定临界值 | 第38页 |
| 3.3.5 选择封闭液 | 第38-39页 |
| 3.3.6 ELISA的特异性 | 第39页 |
| 3.3.7 ELISA的敏感性 | 第39-40页 |
| 3.3.8 临床试验 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 4 H9亚型AIV胶体金检测方法建立 | 第43-58页 |
| 4.1 材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 实验用生物材料 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 试剂的配制 | 第43-44页 |
| 4.2 方法 | 第44-49页 |
| 4.2.1 器皿的硅化 | 第44页 |
| 4.2.2 金溶液的制备 | 第44页 |
| 4.2.3 金溶液抗体的制备 | 第44页 |
| 4.2.4 处理结合垫和样品垫方法 | 第44页 |
| 4.2.5 抗体喷涂及金垫制备 | 第44-45页 |
| 4.2.6 胶体金试纸条组成 | 第45页 |
| 4.2.7 鸡抗AIV多克隆抗体的制备及纯化 | 第45-46页 |
| 4.2.8 免疫胶体金层析法各种最佳条件的选择 | 第46-49页 |
| 4.2.9 试纸条的特异性 | 第49页 |
| 4.2.10 试纸条的敏感性 | 第49页 |
| 4.2.11 H9亚型AIV检测 | 第49页 |
| 4.2.12 试纸条的稳定性 | 第49页 |
| 4.3 结果 | 第49-54页 |
| 4.3.1 试纸条检测方法的建立 | 第49-52页 |
| 4.3.1.1 金颗粒的制备 | 第49-50页 |
| 4.3.1.2 5E1单抗蛋白量的确定 | 第50页 |
| 4.3.1.3 标记用缓冲液的选择 | 第50-51页 |
| 4.3.1.4 抗体标记后的胶体金结果 | 第51页 |
| 4.3.1.5 鸡多抗AIV H9-IGg、羊抗鼠IgG喷涂量的确定 | 第51页 |
| 4.3.1.6 试纸条的判断标准 | 第51-52页 |
| 4.3.2 特异性试验 | 第52页 |
| 4.3.2.1 检测畜禽类病毒 | 第52页 |
| 4.3.2.2 检测其它亚型病毒 | 第52页 |
| 4.3.3 试纸条的敏感性 | 第52-53页 |
| 4.3.4 H9亚型AIV检测 | 第53页 |
| 4.3.5 试纸条的重复性 | 第53-54页 |
| 4.3.6 试纸条的稳定性 | 第54页 |
| 4.4 临床应用试验 | 第54-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-58页 |
| 5 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |