| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·模式生物秀丽线虫中的低氧应答研究 | 第11-14页 |
| ·HIF-1 介导的通路 | 第12-13页 |
| ·胰岛素/胰岛素样受体DAF-2 通路 | 第13-14页 |
| ·热休克蛋白及其他 | 第14页 |
| ·可变剪接及其在低氧应答中调控作用 | 第14-19页 |
| ·可变剪接(Alternative Splicing，AS) | 第15页 |
| ·HIF-1 的可变剪接在缺氧应答中的调控作用 | 第15-16页 |
| ·脯氨酰羟化酶家族新成员: PHD(Proline Hydroxylase Domain)的可变剪接在缺氧应答中的调控作用 | 第16-17页 |
| ·血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的可变剪接在缺氧应答中的调控作用 | 第17页 |
| ·可变剪接在缺氧相关疾病中的调控作用 | 第17-19页 |
| ·本研究的内容、目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 利用RNAi 文库筛查秀丽线虫体内与缺氧相关的剪接调节因子及其靶基因 | 第21-30页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·实验动物及试剂 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-26页 |
| ·秀丽线虫饲养 | 第22页 |
| ·利用CaCl_2 法制备HT115 感受态细胞 | 第22页 |
| ·用于RNA 干涉的对照菌液的制备 | 第22-23页 |
| ·秀丽线虫同步化培养 | 第23页 |
| ·喂饲RNAi 流程 | 第23-24页 |
| ·线虫的物理缺氧 | 第24页 |
| ·规模化筛选影响缺氧损伤表型的基因 | 第24-25页 |
| ·测序鉴定筛选的阳性克隆 | 第25-26页 |
| ·结果 | 第26-28页 |
| ·喂饲RNAi 筛选有效性检测 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 利用功能丧失型突变株系验证RNAi 文库的筛查结果 | 第30-39页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·实验动物及试剂 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·秀丽线虫饲养 | 第31页 |
| ·基因功能丧失型突变株系的鉴定 | 第31-33页 |
| ·基因功能丧失型突变株系的回交 | 第33-34页 |
| ·秀丽线虫的同步化培养 | 第34页 |
| ·秀丽线虫的缺氧处理 | 第34页 |
| ·统计分析 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·功能丧失型突变株系的鉴定 | 第35页 |
| ·突变株系的回交 | 第35-36页 |
| ·缺氧处理线虫突变株系 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 物理缺氧模型中egl-9 剪接变体表达模式的变化 | 第39-49页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·线虫同步化培养 | 第40页 |
| ·线虫的物理缺氧 | 第40页 |
| ·线虫总RNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·反转录反应 | 第41-42页 |
| ·设计鉴定egl-9 剪接变体的引物 | 第42-43页 |
| ·PCR 检测基因egl-9 剪接变体缺氧前后的表达变化 | 第43页 |
| ·PCR 产物测序鉴定 | 第43-44页 |
| ·统计分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·提取的总RNA 质量鉴定 | 第44-45页 |
| ·egl-9 剪接变体缺氧前后mRNA 表达水平的变化 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第五章 egl-9 剪接变体表达载体的构建及转基因线虫的制备与鉴定 | 第49-66页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·实验动物及材料 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-59页 |
| ·设计egl-9 剪接变体的扩增引物 | 第50页 |
| ·线虫总RNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·RT 反应 | 第51页 |
| ·剪接变体表达载体的构建 | 第51-55页 |
| ·转基因线虫的制备 | 第55-58页 |
| ·转基因线虫的鉴定 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-63页 |
| ·构建egl-9 剪接变体的表达载体 | 第59-60页 |
| ·成功制备转基因线虫 | 第60-62页 |
| ·转基因线虫的鉴定 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 第六章 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
| 攻读学位期间发表或投稿的文章 | 第78页 |
