| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12-13页 |
| 1.2 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.2.1 BPIV3病原学 | 第13-17页 |
| 1.2.2 BPIV3流行病学 | 第17页 |
| 1.2.3 BPIV3诊断 | 第17-19页 |
| 1.3 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 重组菌、病毒、血清及临床样品 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 抗原表位区域的筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.2 目的基因的克隆 | 第22-25页 |
| 2.2.3 重组原核表达载体pET28a（+）-NP-HN的构建与鉴定 | 第25页 |
| 2.2.4 融合蛋白NP-HN的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.5 融合蛋白NP-HN可溶性分析 | 第26页 |
| 2.2.6 融合蛋白NP-HN的纯化、鉴定及浓度测定 | 第26页 |
| 2.2.7 多克隆抗体的制备与检测 | 第26-27页 |
| 2.2.8 间接ELISA检测方法的建立与优化 | 第27-28页 |
| 2.2.9 临床样品检测 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-41页 |
| 3.1 抗原表位区的筛选 | 第29页 |
| 3.2 NP-HN基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.3 克隆载体pEASY-T1-NP-HN酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 3.4 表达载体pET28a（+）-NP-HN的鉴定 | 第31页 |
| 3.5 融合蛋白的诱导表达、可溶性分析及纯化 | 第31-32页 |
| 3.6 融合蛋白NP-HN的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.7 多克隆抗体的制备与检测 | 第33-34页 |
| 3.7.1 多克隆抗体效价测定 | 第33页 |
| 3.7.2 多克隆抗体特异性的检测 | 第33页 |
| 3.7.3 Western blot检测多克隆抗体 | 第33-34页 |
| 3.8 间接ELISA工作条件的优化 | 第34-39页 |
| 3.8.1 包被抗原及一抗的最佳稀释浓度 | 第34-35页 |
| 3.8.2 抗原包被的最佳条件的确定 | 第35页 |
| 3.8.3 最适封闭液及封闭时间的选择 | 第35-36页 |
| 3.8.4 最佳二抗浓度的选择 | 第36页 |
| 3.8.5 最佳显色时间的选择 | 第36-37页 |
| 3.8.6 BPIV3间接ELISA判定标准 | 第37页 |
| 3.8.7 特异性试验 | 第37-38页 |
| 3.8.8 敏感性试验 | 第38页 |
| 3.8.9 重复性试验 | 第38-39页 |
| 3.8.10 符合率试验 | 第39页 |
| 3.9 临床样品检测 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 目的基因的选择 | 第41页 |
| 4.2 NP-HN融合蛋白的原核表达 | 第41-42页 |
| 4.3 多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 4.4 间接ELISA方法的建立 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |
