| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 纤维素和纤维素酶 | 第12-15页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第12-13页 |
| 1.1.2 纤维素复合酶 | 第13-15页 |
| 1.2 产生纤维素酶的生物 | 第15-16页 |
| 1.2.1 真菌产生的纤维素酶 | 第15页 |
| 1.2.2 细菌产生的纤维素酶 | 第15页 |
| 1.2.3 放线菌产生的纤维素酶 | 第15-16页 |
| 1.2.4 动物产生的纤维素酶 | 第16页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第16-17页 |
| 1.4 纤维素酶在工业上的应用 | 第17-18页 |
| 1.4.1 纤维素酶应用在纺织业上 | 第17页 |
| 1.4.2 纤维素酶应用在食品业上 | 第17页 |
| 1.4.3 纤维素酶应用在饲料业上 | 第17-18页 |
| 1.4.4 纤维素酶应用在生物能源上 | 第18页 |
| 1.4.5 纤维素酶应用在造纸业上 | 第18页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.2 药品及酶类 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂及配方 | 第22-25页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 黄绿木霉的培养 | 第25页 |
| 2.2.2 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第25-29页 |
| 2.2.3 基因生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.4 酿酒酵母重组载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.5 酶切与连接 | 第32-34页 |
| 2.2.6 酿酒酵母转化 | 第34-35页 |
| 2.2.7 内切葡聚糖酶的诱导表达及分析 | 第35-36页 |
| 2.2.8 重组酶的诱导表达及分析 | 第36页 |
| 2.2.9 重组酶的酶学特性及动力学分析 | 第36-39页 |
| 2.2.10 重组转化子发酵条件的优化 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-64页 |
| 3.1 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.1.1 黄绿木霉总DNA和RNA的提取 | 第41页 |
| 3.1.2 基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.2 基因序列分析 | 第43-46页 |
| 3.2.1 内切葡聚糖酶Ⅱ基因序列的分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 内切葡聚糖酶蛋白质结构分析 | 第44-46页 |
| 3.3 酿酒酵母整合载体YPIGH的构建 | 第46-48页 |
| 3.3.1PCR扩增序列 | 第46-47页 |
| 3.3.2 载体双酶切的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 重组表达载体的构建及转化 | 第48-50页 |
| 3.4.1 构建游离表达质粒 | 第48-49页 |
| 3.4.2 重组表达质粒的构建 | 第49页 |
| 3.4.3 表达载体的转化 | 第49-50页 |
| 3.4.4 酿酒酵母转化子的鉴定 | 第50页 |
| 3.5 内切葡聚糖酶基因的诱导表达及分析 | 第50-52页 |
| 3.5.1 黄绿木霉RNA提取 | 第50-51页 |
| 3.5.2 黄绿木霉c DNA的验证 | 第51页 |
| 3.5.3 基因的实时荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 3.6 重组酶的诱导表达及分析 | 第52页 |
| 3.7 酶学特性及动力学常数分析 | 第52-61页 |
| 3.7.1 葡萄糖标准曲线 | 第52-53页 |
| 3.7.2 重组蛋白的SDS-PAGE和水解圈分析 | 第53-54页 |
| 3.7.3 重组内切葡聚糖酶的酶学特性分析 | 第54-56页 |
| 3.7.4 酶促动力学分析 | 第56-61页 |
| 3.8 内切葡聚糖酶的发酵条件优化 | 第61-64页 |
| 3.8.1β-半乳糖含量对酶活性影响的分析 | 第61页 |
| 3.8.2YNB含量对酶活性影响的分析 | 第61-62页 |
| 3.8.3 通氧量对酶活性影响的分析 | 第62页 |
| 3.8.4 温度对酶活性影响的分析 | 第62页 |
| 3.8.5 重组酿酒酵母发酵条件的正交实验 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第64页 |
| 4.1.1 基因供体的选择 | 第64页 |
| 4.1.2 基因生物信息学分析 | 第64页 |
| 4.2 内切葡聚糖酶基因的表达 | 第64-67页 |
| 4.2.1 基因表达系统的选择 | 第64-65页 |
| 4.2.2 制约外源基因表达的因素 | 第65页 |
| 4.2.3 关于构建高效表达载体方面的讨论 | 第65-66页 |
| 4.2.4 内切葡聚糖酶诱导表达的研究 | 第66页 |
| 4.2.5 内切葡聚糖酶酶学特性分析 | 第66页 |
| 4.2.6 内切葡聚糖酶发酵条件的优化 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76页 |