| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1. 综述 | 第9-19页 |
| 1.1 烟碱 | 第9-12页 |
| 1.1.1 烟碱的发现 | 第9页 |
| 1.1.2 烟碱的基本性质 | 第9页 |
| 1.1.3 烟碱的用途 | 第9页 |
| 1.1.4 烟碱在烟草中的分布及其对烟质的影响 | 第9-10页 |
| 1.1.5 烟碱的危害 | 第10-11页 |
| 1.1.6 烟草中烟碱的生物合成途径 | 第11-12页 |
| 1.2 传统烤烟烟碱调控技术 | 第12-14页 |
| 1.2.1 培育优良的品种 | 第12页 |
| 1.2.2 实现区域化种植 | 第12-13页 |
| 1.2.3 农艺栽培措施降低烟碱含量 | 第13-14页 |
| 1.3 现代基因工程技术调控烤烟烟碱含量 | 第14页 |
| 1.4 RNAi在烟草烟碱调控中应用 | 第14-19页 |
| 1.4.1 RNAi发现 | 第14-15页 |
| 1.4.2 细胞自主性RNAi的机制 | 第15-16页 |
| 1.4.3 非细胞自主式RNAi及其在植物中的应用 | 第16-19页 |
| 2. 引言 | 第19-20页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第19页 |
| 2.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3. 材料与方法 | 第20-32页 |
| 3.1 材料 | 第20页 |
| 3.1.1 试剂耗材 | 第20页 |
| 3.1.2 仪器 | 第20页 |
| 3.2 试验技术路线 | 第20-21页 |
| 3.3 试验方法 | 第21-32页 |
| 3.3.1 烟草根部cDNA的获得 | 第21-23页 |
| 3.3.2 克隆载体PMD-19HE的构建 | 第23-27页 |
| 3.3.3 表达载体PET21-HE的构建 | 第27-28页 |
| 3.3.4 表达dsRNA工程菌株hp-330的构建 | 第28-29页 |
| 3.3.5 工程菌株hp-330发酵条件的优化 | 第29-30页 |
| 3.3.6 盆栽试验 | 第30-31页 |
| 3.3.7 大田试验 | 第31-32页 |
| 4. 结果与分析 | 第32-48页 |
| 4.1 烟草根部CDNA的获得 | 第32-35页 |
| 4.2 克隆载体PMT-19HE的构建 | 第35-39页 |
| 4.2.1 引物的设计 | 第35-36页 |
| 4.2.2 PMT基因部分序列E382、H512的检测 | 第36-37页 |
| 4.2.3 E382、H512酶切产物回收后电泳检测 | 第37页 |
| 4.2.4 克隆载体pMD19-HE的检测及酶切验证 | 第37-38页 |
| 4.2.5 质粒pMD19-HE测序结果 | 第38-39页 |
| 4.3 表达载体PET21-HE的构建 | 第39-41页 |
| 4.3.1 HE(-)和pet21a(-)检测 | 第39-40页 |
| 4.3.2 PET21-HE的酶切验证 | 第40-41页 |
| 4.4 诱导工程菌株HP-330表达HP-RNA以及HPRNA的验证 | 第41-43页 |
| 4.5 工程菌株HP-330发酵条件的优化 | 第43-45页 |
| 4.5.1 最佳诱导时间的确定 | 第43-44页 |
| 4.5.2 最佳诱导物浓度的确定 | 第44-45页 |
| 4.6 盆栽试验 | 第45-46页 |
| 4.6.1 半定量RT-PCR试验结果 | 第45-46页 |
| 4.6.2 盆栽试验烟碱含量测定结果 | 第46页 |
| 4.7 大田试验结果 | 第46-48页 |
| 5. 结论与讨论 | 第48-50页 |
| 5.1 结论 | 第48-49页 |
| 5.1.1 烟草PMT基因cDNA的获得 | 第48页 |
| 5.1.2 表达hpRNA反向重复序列结构的构建 | 第48页 |
| 5.1.3 工程菌DY-hp发酵hpRNA的条件优化 | 第48页 |
| 5.1.4 盆栽试验 | 第48页 |
| 5.1.5 大田试验 | 第48-49页 |
| 5.2 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| ABSTRACT | 第55-56页 |
