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H5N1亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因在植物中的表达

摘要第7-8页
Abstract第8-9页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-21页
    1.1 研究背景第11-12页
        1.1.1 禽流感与禽流感病毒第11页
        1.1.2 禽流感疫苗的研究概况第11-12页
    1.2 转基因植物疫苗的原理和策略第12-14页
        1.2.1 转基因植物疫苗的原理第12-13页
        1.2.2 转基因植物疫苗表达系统第13-14页
    1.3 影响农杆菌介导单子叶植物转基因效率的因素第14-15页
    1.4 筛选标记基因第15-16页
        1.4.1 标记基因的安全性问题第15-16页
        1.4.2 安全标记基因pmi第16页
    1.5 转基因植物疫苗研究现状第16-18页
        1.5.1 大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位(LT-B)在植物中的表达第17页
        1.5.2 乙肝表面抗原(HBsAg)在植物中的表达第17-18页
        1.5.3 口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1在植物中的表达第18页
    1.6 转基因疫苗存在的问题及展望第18-20页
        1.6.1 选择强启动子和非组成型启动子第18-19页
        1.6.2 根据密码子的简并性选择植物偏爱的基因序列第19页
        1.6.3 利用某些特定调控序列增强表达第19-20页
        1.6.4 植物膜泡运输机制靶向表达抗原蛋白第20页
    1.7 本研究目的及意义第20-21页
2 材料与方法第21-36页
    2.1 实验材料第21-25页
        2.1.1 菌株及质粒第21页
        2.1.2 植物材料第21页
        2.1.3 酶和试剂第21页
        2.1.4 培养基及试剂第21-24页
        2.1.5 引物第24-25页
    2.2 实验方法第25-36页
        2.2.1 质粒 DNA提取第25-26页
        2.2.2 DNA片段回收第26页
        2.2.3 感受态细胞制备及转化第26-27页
        2.2.4 PCR扩增第27页
        2.2.5 GST蛋白诱导表达及纯化第27-28页
        2.2.6 烟草叶片瞬时表达第28页
        2.2.7 拟南芥转化及筛选第28-29页
        2.2.8 拟南芥叶片DNA提取第29页
        2.2.9 转基因拟南芥的RT-PCR检测第29-31页
        2.2.10 叶片总蛋白的提取及纯化第31-32页
        2.2.11 ELISA第32页
        2.2.12 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第32-33页
        2.2.13 Western blot第33页
        2.2.14 农杆菌介导的小麦幼胚转化第33-34页
        2.2.15 转化后愈伤组织的恢复培养、筛选及分化第34页
        2.2.16 抗性植株的壮苗、春化及移栽第34页
        2.2.17 转化苗的鉴定第34-36页
3 结果与分析第36-47页
    3.1 HA、NA基因的扩增第36页
    3.2 原核表达与纯化第36-38页
        3.2.1 原核表达载体的构建第36-37页
        3.2.2 原核表达条件试验第37-38页
    3.3 植物表达载体的构建并转化根癌农杆菌第38-41页
        3.3.1 双子叶植物表达载体的构建第38-39页
        3.3.2 单子叶植物表达载体的构建第39-41页
    3.4 烟草瞬时表达及Western blot杂交检测第41-42页
    3.5 拟南芥转化、筛选及分子水平和蛋白水平的鉴定第42-45页
        3.5.1 拟南芥转化、筛选及PCR鉴定第42页
        3.5.2 T_2代转基因拟南芥的ELISA筛选第42-44页
        3.5.3 T_2代转基因拟南芥的RT-PCR检测第44页
        3.5.4 T_2代转基因拟南芥的Western blot杂交检测第44-45页
    3.6 小麦幼胚愈伤组织的转化和筛选第45-46页
        3.6.1 农杆菌转化小麦幼胚愈伤组织第45页
        3.6.2 转化后愈伤组织的恢复培养、筛选及分化第45-46页
    3.7 小麦幼苗的CPR检测第46-47页
    3.8 小麦幼苗的PCR检测第47页
4 讨论第47-51页
参考文献第51-59页
致谢第59页

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