| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-12页 |
| 1.1.1 禽流感与禽流感病毒 | 第11页 |
| 1.1.2 禽流感疫苗的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.2 转基因植物疫苗的原理和策略 | 第12-14页 |
| 1.2.1 转基因植物疫苗的原理 | 第12-13页 |
| 1.2.2 转基因植物疫苗表达系统 | 第13-14页 |
| 1.3 影响农杆菌介导单子叶植物转基因效率的因素 | 第14-15页 |
| 1.4 筛选标记基因 | 第15-16页 |
| 1.4.1 标记基因的安全性问题 | 第15-16页 |
| 1.4.2 安全标记基因pmi | 第16页 |
| 1.5 转基因植物疫苗研究现状 | 第16-18页 |
| 1.5.1 大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位(LT-B)在植物中的表达 | 第17页 |
| 1.5.2 乙肝表面抗原(HBsAg)在植物中的表达 | 第17-18页 |
| 1.5.3 口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1在植物中的表达 | 第18页 |
| 1.6 转基因疫苗存在的问题及展望 | 第18-20页 |
| 1.6.1 选择强启动子和非组成型启动子 | 第18-19页 |
| 1.6.2 根据密码子的简并性选择植物偏爱的基因序列 | 第19页 |
| 1.6.3 利用某些特定调控序列增强表达 | 第19-20页 |
| 1.6.4 植物膜泡运输机制靶向表达抗原蛋白 | 第20页 |
| 1.7 本研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 培养基及试剂 | 第21-24页 |
| 2.1.5 引物 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 质粒 DNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 DNA片段回收 | 第26页 |
| 2.2.3 感受态细胞制备及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第27页 |
| 2.2.5 GST蛋白诱导表达及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 烟草叶片瞬时表达 | 第28页 |
| 2.2.7 拟南芥转化及筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.8 拟南芥叶片DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.9 转基因拟南芥的RT-PCR检测 | 第29-31页 |
| 2.2.10 叶片总蛋白的提取及纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.11 ELISA | 第32页 |
| 2.2.12 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.13 Western blot | 第33页 |
| 2.2.14 农杆菌介导的小麦幼胚转化 | 第33-34页 |
| 2.2.15 转化后愈伤组织的恢复培养、筛选及分化 | 第34页 |
| 2.2.16 抗性植株的壮苗、春化及移栽 | 第34页 |
| 2.2.17 转化苗的鉴定 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-47页 |
| 3.1 HA、NA基因的扩增 | 第36页 |
| 3.2 原核表达与纯化 | 第36-38页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 原核表达条件试验 | 第37-38页 |
| 3.3 植物表达载体的构建并转化根癌农杆菌 | 第38-41页 |
| 3.3.1 双子叶植物表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 单子叶植物表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.4 烟草瞬时表达及Western blot杂交检测 | 第41-42页 |
| 3.5 拟南芥转化、筛选及分子水平和蛋白水平的鉴定 | 第42-45页 |
| 3.5.1 拟南芥转化、筛选及PCR鉴定 | 第42页 |
| 3.5.2 T_2代转基因拟南芥的ELISA筛选 | 第42-44页 |
| 3.5.3 T_2代转基因拟南芥的RT-PCR检测 | 第44页 |
| 3.5.4 T_2代转基因拟南芥的Western blot杂交检测 | 第44-45页 |
| 3.6 小麦幼胚愈伤组织的转化和筛选 | 第45-46页 |
| 3.6.1 农杆菌转化小麦幼胚愈伤组织 | 第45页 |
| 3.6.2 转化后愈伤组织的恢复培养、筛选及分化 | 第45-46页 |
| 3.7 小麦幼苗的CPR检测 | 第46-47页 |
| 3.8 小麦幼苗的PCR检测 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
