| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 复制原点识别复合体(ORC)的研究进展 | 第13-21页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 真核DNA复制原点和复制原点识别复合体 | 第13-16页 |
| ·真核DNA复制原点 | 第14页 |
| ·复制原点识别复合体的基因组织和进化 | 第14-15页 |
| ·复制原点识别复合体特定的结构特性 | 第15-16页 |
| 2 ORC的细胞定位与功能分析 | 第16-17页 |
| 3 ORC的复制相关功能的作用机制 | 第17-19页 |
| ·酿酒酵母ORC对自主复制序列的识别 | 第17-18页 |
| ·其他物种ORC对复制原点的识别 | 第18页 |
| ·辅助ORC识别复制原点的其他因子 | 第18页 |
| ·复制前复合体的维持 | 第18-19页 |
| 4 ORC的其他非复制相关功能 | 第19页 |
| 5 研究前沿与展望 | 第19-21页 |
| 第二章 一般材料和常规实验方法 | 第21-27页 |
| 1 一般材料 | 第21-22页 |
| ·菌种和载体 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·其它主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·家蚕的饲养 | 第21-22页 |
| 2 常用试剂的配制 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA用溶液 | 第22-23页 |
| ·玻璃奶回收所需溶液的配制 | 第23页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第23-24页 |
| 3 方法 | 第24-27页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第24页 |
| ·DNA和RNA浓度测定 | 第24页 |
| ·质粒DNA的限制性内切酶反应 | 第24-25页 |
| ·玻璃奶法纯化回收DNA片段 | 第25页 |
| ·DNA连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·质粒DNA或连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| 第三章 家蚕ORC家族的建立 | 第27-35页 |
| 1 相关的生物信息学程序及网站 | 第27页 |
| ·程序 | 第27页 |
| ·网站 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-34页 |
| ·家蚕ORC1相关的EST序列 | 第27-28页 |
| ·家蚕ORC2相关的EST序列 | 第28-29页 |
| ·家蚕ORC3相关的EST序列 | 第29-31页 |
| ·家蚕ORC4相关的EST序列 | 第31-32页 |
| ·家蚕ORC5相关的EST序列 | 第32-34页 |
| ·家蚕ORC6相关的EST序列 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 家蚕ORC家族基因的克隆和生物信息学分析 | 第35-53页 |
| 1 材料和试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-40页 |
| ·电子克隆 | 第35页 |
| ·利用Trizol抽提组织总RNA | 第35-36页 |
| ·cDNA第一链的合成及RT-PCR | 第36页 |
| ·cDNA的3’末端快速扩增(3’RACE) | 第36-37页 |
| ·cDNA的5’末端快速扩增 | 第37-39页 |
| ·本章所用PCR引物 | 第39页 |
| ·目的片段的回收、克隆及测序 | 第39页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果分析 | 第40-51页 |
| ·ORC家族基因的克隆与分析 | 第40-44页 |
| ·家蚕ORC家族成员的系统发生分析 | 第44-45页 |
| ·家蚕ORC家族氨基酸序列相似性比对 | 第45-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 家蚕ORC家族基因组织分布 | 第53-61页 |
| 1 材料和试剂 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-54页 |
| ·组织总RNA提取反转录PCR(RT-PCR) | 第53页 |
| ·荧光定量PCR(Realtime Quantitative PCR) | 第53页 |
| ·荧光定量PCR引物表 | 第53-54页 |
| ·荧光定量数据处理 | 第54页 |
| 3 结果分析 | 第54-60页 |
| ·标准样荧光定量反应的扩增曲线和熔解曲线 | 第54-56页 |
| ·标准样荧光定量反应的标准曲线 | 第56-57页 |
| ·组织分布调查 | 第57-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 家蚕ORC基因胚胎发育时期的表达分析 | 第61-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第61页 |
| ·蚕种 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| ·蚕种催青 | 第61页 |
| ·总RNA提取(Solution D法) | 第61-62页 |
| ·cDNA合成及荧光定量PCR | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-65页 |
| ·扩增曲线和熔解曲线 | 第62-64页 |
| ·家蚕ORC家族胚胎发育时期的表达 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 第七章 病毒侵染对ORC的表达的影响 | 第66-71页 |
| 1 材料与试剂 | 第66页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-67页 |
| ·家蚕饲养及同步化 | 第66页 |
| ·病毒接种 | 第66页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR及数据处理 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| ·扩增曲线和熔解曲线 | 第67-69页 |
| ·家蚕ORC的表达变化 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 第八章 家蚕类p23蛋白基因的表达分析(已发表的工作) | 第71-78页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-73页 |
| ·材料及主要试剂 | 第72页 |
| ·温度胁迫、家蚕总RNA的提取及cDNA第一链合成 | 第72页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第72页 |
| ·类p23的组织表达谱分析 | 第72-73页 |
| ·类p23在温度胁迫条件下的表达 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-76页 |
| ·类p23的组织表达谱 | 第73页 |
| ·类p23在温度胁迫条件下的表达 | 第73-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 在学期间发表的论文 | 第86页 |
