| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一部分 | 第14-23页 |
| 第一章 家蚕emc 基因的研究进展 | 第15-21页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1 HLH 超家族 | 第15页 |
| ·HLH 结构域的构成 | 第15-17页 |
| ·HLH 家族蛋白的分类 | 第17-18页 |
| 2 emc 蛋白的生物学功能 | 第18页 |
| ·emc 蛋白与细胞分化 | 第18页 |
| ·emc 蛋白与转录调控 | 第18-19页 |
| ·emc 蛋白与信号转导 | 第19-20页 |
| ·研究现状及展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程 | 第22页 |
| ·Bmemc 基因的原核表达与组织定位 | 第22页 |
| ·与Notch 信号途径相关的功能研究 | 第22-23页 |
| 第二部分 | 第23-72页 |
| 第三章 序列分析 | 第24-32页 |
| 1 生物信息学工具和软件 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-30页 |
| ·Bmemc 基因的序列 | 第24-25页 |
| ·疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·跨膜分析 | 第26页 |
| ·信号肽分析 | 第26-27页 |
| ·定位分析 | 第27页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第27-28页 |
| ·二级结构预测 | 第28页 |
| ·高级结构预测 | 第28-29页 |
| ·Bmemc 基因氨基酸序列的同源性分析 | 第29-30页 |
| ·Bmemc 基因进化树的构建 | 第30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 原核表达与抗体制备 | 第32-51页 |
| 1 材料与试剂 | 第32-36页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-36页 |
| ·碱法小量制备质粒用试剂 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE 电泳用试剂 | 第33页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第33-34页 |
| ·Bradford 检测用试剂[63] | 第34页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第34页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第34-35页 |
| ·ELISA 抗体效价测定用试剂 | 第35页 |
| ·Western blotting 用试剂 | 第35-36页 |
| 2 方法 | 第36-44页 |
| ·Bmemc 基因的克隆 | 第36-39页 |
| ·PCR 获得完整的ORF 序列 | 第36页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a 的双酶切 | 第36-37页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·CaC12 法制备E.coli TG1、BL21（DE3）感受态细胞 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白表达产物存在形式的检测分析 | 第40页 |
| ·重组蛋白的大量表达与样品制备 | 第40-41页 |
| ·Ni-NTA 柱纯化融合蛋白 | 第41页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度[63] | 第41页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第42页 |
| ·抗体的制备 | 第42-43页 |
| ·抗原的制备 | 第42页 |
| ·免疫动物 | 第42页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第42-43页 |
| ·抗体的效价测定 | 第43页 |
| ·抗体的纯化 | 第43-44页 |
| ·Western blotting 检测 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| ·PCR 扩增目的基因片段 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pET-28a-Bmemc 的鉴定 | 第45-46页 |
| ·Bmemc 蛋白的诱导表达及纯化 | 第46页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第46-47页 |
| ·质谱分析 | 第47-48页 |
| ·抗体的效价测定 | 第48页 |
| ·抗体的纯化 | 第48-49页 |
| ·Western blotting 检测抗体特异性 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 Bmemc 基因在转录和蛋白表达水平的差异检测 | 第51-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第51页 |
| ·主要试剂的配置 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·总RNA 浓度的测量及电泳检测 | 第53页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第53-54页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第54页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第55页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第55页 |
| ·Western blotting 分析 | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-62页 |
| ·发育过程中Bmemc 基因转录水平的变化 | 第56-58页 |
| ·荧光定量PCR 扩增曲线与熔解曲线 | 第56-57页 |
| ·各发育时期RT-PCR 产物电泳检测 | 第57页 |
| ·家蚕四个发育时期Bmemc 基因的RT-PCR 数据结果 | 第57-58页 |
| ·家蚕四个发育时期中Bmemc 基因的表达水平变化 | 第58-59页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中Bmemc 基因的转录水平的变化 | 第59-62页 |
| ·荧光定量PCR 扩增曲线与熔解曲线 | 第59-60页 |
| ·五龄幼虫各组织RT-PCR 产物电泳检测 | 第60页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中Bmemc 基因的RT-PCR 数据结果 | 第60-62页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中Bmemc 基因的表达水平的变化 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 Notch 信号途径相关研究 | 第64-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂与仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| ·Bm5 细胞的培养 | 第64-65页 |
| ·Bm5 细胞的复苏 | 第64-65页 |
| ·Bm5 细胞的传代培养 | 第65页 |
| ·不同浓度DAPT 处理 | 第65页 |
| ·不同时间DAPT 处理 | 第65页 |
| ·RNA 的提取与逆转录反应 | 第65页 |
| ·荧光定量PCR | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-71页 |
| ·不同浓度DAPT 处理后Bmemc 基因的转录水平变化 | 第66-68页 |
| ·荧光定量PCR 扩增曲线和熔解曲线 | 第66-67页 |
| ·不同浓度DAPT 处理后荧光定量PCR 产物电泳图 | 第67页 |
| ·不同浓度DAPT 处理后荧光定量PCR 数据处理 | 第67-68页 |
| ·不同时间 DAPT 处理后 Bmemc 基因的转录水平变化 | 第68-71页 |
| ·荧光定量 PCR 扩增曲线和熔解曲线 | 第68-69页 |
| ·不同时间 DAPT 处理后荧光定量 PCR 产物电泳图 | 第69-70页 |
| ·不同时间 DAPT 处理后荧光定量 PCR 数据处理 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
