| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 缩略语 | 第13-15页 |
| 第一章 蛋白乙酰化与去乙酰化修饰的研究进展 | 第15-20页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1 蛋白乙酰化修饰研究概况 | 第15页 |
| 2 乙酰基转移酶和去乙酰化酶 | 第15-17页 |
| ·乙酰基转移酶 | 第15-16页 |
| ·去乙酰化酶 | 第16-17页 |
| 3 JAK-STAT 途径乙酰化修饰的研究进展 | 第17-20页 |
| ·JAK-STAT 家族的分类 | 第17-18页 |
| ·STAT3 的乙酰化 | 第18页 |
| ·STAT1 和SIRT6 的乙酰化 | 第18-19页 |
| ·受体的乙酰化 | 第19页 |
| ·乙酰化修饰的研究意义及其展望 | 第19-20页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第20-22页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第20页 |
| 2 研究内容 | 第20-21页 |
| 3 实验流程图 | 第21-22页 |
| 第三章 突变体的构建和SIRT5 SIRT7 的克隆 | 第22-37页 |
| 1 材料与试剂 | 第22-25页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-32页 |
| ·一次PCR 引入突变点 | 第25-28页 |
| ·重叠延伸法引入突变点 | 第28-30页 |
| ·pcDNA3.1-Flag-SIRT5 的构建 | 第30-31页 |
| ·pcDNA3.1-Flag-SIRT7 的构建 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-35页 |
| ·双酶切鉴定结果 | 第32-35页 |
| ·测序鉴定结果 | 第35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 STAT3 的新乙酰化位点 | 第37-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·试剂的配制 | 第38-41页 |
| 2 方法 | 第41-45页 |
| ·细胞的培养和转染 | 第41-43页 |
| ·血清饥饿实验 | 第43页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第43-44页 |
| ·IP | 第44页 |
| ·Western blotting 检测 | 第44-45页 |
| ·荧光素酶报告基因活性检测 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-49页 |
| ·STAT3Ly5685 乙酰化与磷酸化之间的关系 | 第45-46页 |
| ·STAT3 新位点的乙酰化及其对磷酸化的影响 | 第46-47页 |
| ·血清饥饿时STAT3 乙酰化和磷酸化关系研究 | 第47-48页 |
| ·CBP 乙酰化调节对STAT3 转录功能的影响 | 第48页 |
| ·不同位点对IFNα诱导STAT3 活性的影响 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 第五章 SIRTs 对STAT3 的去乙酰化修饰 | 第52-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·试剂的配制 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-54页 |
| ·RNA 干扰 | 第53页 |
| ·细胞的培养和质粒转染 | 第53页 |
| ·IP 及其Western blotting 实验 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-55页 |
| ·SIRTs RNA 干扰后内源STAT3 乙酰化的改变 | 第54页 |
| ·SIRTs 过表达后过表达STAT3 乙酰化的改变 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 STAT3 与SIRT5 和SIRT7 的相互作用 | 第57-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·试剂的配制 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| ·细胞的培养与转染 | 第57-59页 |
| ·Co-IP | 第59页 |
| ·Western blotting 实验 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-61页 |
| ·STAT3 的截短体与SIRT5 的相互作用 | 第59-60页 |
| ·STAT3 的突变体与SIRT5 的相互作用 | 第60-61页 |
| ·STAT3 的截短体与SIRT7 的相互作用 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第七章 SIRT5 自身的乙酰化修饰和对STAT3 转录活性的调节 | 第63-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·试剂的配制 | 第63-64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| ·细胞的培养与转染 | 第64-65页 |
| ·IP 及其Western blotting 检测 | 第65页 |
| ·细胞核与细胞浆蛋白的分离 | 第65页 |
| ·荧光素酶报告基因检测 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-67页 |
| ·SIRT5 的乙酰化修饰 | 第66页 |
| ·SIRT5 的分布 | 第66页 |
| ·SIRTs 对STAT3 转录活性的调节 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 在学期间发表论文 | 第75页 |
