中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
文献综述 | 第11-18页 |
引言 | 第18-19页 |
材料与方法 | 第19-27页 |
1 试验材料 | 第19-20页 |
1.1 病样来源 | 第19页 |
1.2 植物材料 | 第19页 |
1.3 菌种和载体 | 第19页 |
1.4 酶和化学试剂 | 第19页 |
1.5 抗生素及生长素 | 第19-20页 |
2 试验方法 | 第20-27页 |
2.1 总DNA的提取 | 第20页 |
2.2 总RNA的提取 | 第20页 |
2.3 cDNA的合成 | 第20页 |
2.4 感受态细胞的制备 | 第20页 |
2.5 PCR产物的克隆及转化 | 第20-21页 |
2.5.1 PCR产物回收和纯化 | 第20-21页 |
2.5.2 产物转化大肠杆菌 | 第21页 |
2.6 阳性克隆的PCR鉴定 | 第21页 |
2.7 质粒提取 | 第21页 |
2.8 植物表达载体的构建过程 | 第21-23页 |
2.8.1 SVBV中国分离物P6基因及其突变体的构建 | 第21-22页 |
2.8.2 SVBV各基因的克隆 | 第22页 |
2.8.3 二元植物表达载体的构建 | 第22页 |
2.8.4 病毒载体的构建 | 第22-23页 |
2.9 瞬时浸润本氏烟的检测 | 第23-24页 |
2.9.1 qRT-PCR检测 | 第23-24页 |
2.9.2 Northern印迹分析 | 第24页 |
2.9.3 瞬时浸润本氏烟的ELISA检测 | 第24页 |
2.9.4 GFP蛋白的Western Blot分析 | 第24页 |
2.10 双分子荧光互补(BIFC) | 第24-25页 |
2.11 酵母双杂交(Y2H) | 第25页 |
2.12 森林草莓转录组及感染SVBV后基因表达差异比较 | 第25-27页 |
2.12.1 样品的准备和RNA的提取 | 第25页 |
2.12.2 森林草莓cDNA文库的制备和Illumia测序 | 第25-26页 |
2.12.3 比较分析基因的表达量 | 第26页 |
2.12.4 荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异基因 | 第26-27页 |
结果与分析 | 第27-45页 |
1 SVBV中国分离物各基因的克隆与载体构建 | 第27-29页 |
1.1 SVBV各基因的克隆 | 第27页 |
1.2 插入SVBV各基因的病毒表达载体的构建 | 第27-28页 |
1.3 插入SVBV P6基因的双元表达载体的构建 | 第28-29页 |
2 P6症状表型分析 | 第29-33页 |
2.1 pGR-P6和pGR-△P6瞬时浸润本氏烟叶片的症状表型 | 第29-31页 |
2.2 移码突变△P6下游的GFP不能翻译蛋白 | 第31-32页 |
2.3 P6蛋白促进外源基因GFP表达 | 第32-33页 |
3 P6蛋白与SVBV编码其他蛋白间互作验证 | 第33-35页 |
3.1 P2、P4和P6基因的克隆及重组表达载体的构建 | 第33-34页 |
3.2 蛋白互作验证 | 第34-35页 |
4 P6蛋白亚细胞定位 | 第35-36页 |
5 转录组(RNA-Seq)分析SVBV致病机制 | 第36-43页 |
5.1 SVBV接种草莓症状和RNA提取 | 第36-37页 |
5.2 Illumia测序结果概述及序列的拼接 | 第37页 |
5.3 差异表达基因(DEGs)的注释 | 第37-40页 |
5.4 KEGG注释通路分析和关键差异表达基因注释 | 第40-41页 |
5.5 qRT-PCR验证差异基因(DGEs)的表达 | 第41-43页 |
6 P6与草莓宿主基因MYB12的互作关系 | 第43-45页 |
6.1 qRT-PCR验证MYB 12的表达 | 第43-44页 |
6.2 分子荧光互补验证P6与草莓MYB12基因的互作 | 第44-45页 |
6.2.1 P6和MYB基因的克隆及重组表达载体的构建 | 第44页 |
6.2.2 双分子荧光互补验证P6和MYB基因编码蛋白互作 | 第44-45页 |
讨论 | 第45-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-57页 |
致谢 | 第57-58页 |
作者简介 | 第58页 |