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草莓镶脉病毒P6基因致病机制研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-8页
文献综述第11-18页
引言第18-19页
材料与方法第19-27页
    1 试验材料第19-20页
        1.1 病样来源第19页
        1.2 植物材料第19页
        1.3 菌种和载体第19页
        1.4 酶和化学试剂第19页
        1.5 抗生素及生长素第19-20页
    2 试验方法第20-27页
        2.1 总DNA的提取第20页
        2.2 总RNA的提取第20页
        2.3 cDNA的合成第20页
        2.4 感受态细胞的制备第20页
        2.5 PCR产物的克隆及转化第20-21页
            2.5.1 PCR产物回收和纯化第20-21页
            2.5.2 产物转化大肠杆菌第21页
        2.6 阳性克隆的PCR鉴定第21页
        2.7 质粒提取第21页
        2.8 植物表达载体的构建过程第21-23页
            2.8.1 SVBV中国分离物P6基因及其突变体的构建第21-22页
            2.8.2 SVBV各基因的克隆第22页
            2.8.3 二元植物表达载体的构建第22页
            2.8.4 病毒载体的构建第22-23页
        2.9 瞬时浸润本氏烟的检测第23-24页
            2.9.1 qRT-PCR检测第23-24页
            2.9.2 Northern印迹分析第24页
            2.9.3 瞬时浸润本氏烟的ELISA检测第24页
            2.9.4 GFP蛋白的Western Blot分析第24页
        2.10 双分子荧光互补(BIFC)第24-25页
        2.11 酵母双杂交(Y2H)第25页
        2.12 森林草莓转录组及感染SVBV后基因表达差异比较第25-27页
            2.12.1 样品的准备和RNA的提取第25页
            2.12.2 森林草莓cDNA文库的制备和Illumia测序第25-26页
            2.12.3 比较分析基因的表达量第26页
            2.12.4 荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异基因第26-27页
结果与分析第27-45页
    1 SVBV中国分离物各基因的克隆与载体构建第27-29页
        1.1 SVBV各基因的克隆第27页
        1.2 插入SVBV各基因的病毒表达载体的构建第27-28页
        1.3 插入SVBV P6基因的双元表达载体的构建第28-29页
    2 P6症状表型分析第29-33页
        2.1 pGR-P6和pGR-△P6瞬时浸润本氏烟叶片的症状表型第29-31页
        2.2 移码突变△P6下游的GFP不能翻译蛋白第31-32页
        2.3 P6蛋白促进外源基因GFP表达第32-33页
    3 P6蛋白与SVBV编码其他蛋白间互作验证第33-35页
        3.1 P2、P4和P6基因的克隆及重组表达载体的构建第33-34页
        3.2 蛋白互作验证第34-35页
    4 P6蛋白亚细胞定位第35-36页
    5 转录组(RNA-Seq)分析SVBV致病机制第36-43页
        5.1 SVBV接种草莓症状和RNA提取第36-37页
        5.2 Illumia测序结果概述及序列的拼接第37页
        5.3 差异表达基因(DEGs)的注释第37-40页
        5.4 KEGG注释通路分析和关键差异表达基因注释第40-41页
        5.5 qRT-PCR验证差异基因(DGEs)的表达第41-43页
    6 P6与草莓宿主基因MYB12的互作关系第43-45页
        6.1 qRT-PCR验证MYB 12的表达第43-44页
        6.2 分子荧光互补验证P6与草莓MYB12基因的互作第44-45页
            6.2.1 P6和MYB基因的克隆及重组表达载体的构建第44页
            6.2.2 双分子荧光互补验证P6和MYB基因编码蛋白互作第44-45页
讨论第45-49页
结论第49-50页
参考文献第50-57页
致谢第57-58页
作者简介第58页

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