| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 符号及缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| 1、两栖动物皮肤结构特点 | 第10-11页 |
| 2、两栖动物皮肤活性多肽研究进展 | 第11-22页 |
| 2.1 抗菌肽 | 第11-14页 |
| 2.2 缓激肽 | 第14-15页 |
| 2.3 镇痛肽 | 第15-17页 |
| 2.4 铃蟾肽及其相关肽 | 第17-18页 |
| 2.5 神经毒素 | 第18-19页 |
| 2.6 抗氧化肽 | 第19-20页 |
| 2.7 蛋白酶抑制剂 | 第20-22页 |
| 3、半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin超家族及其功能简介 | 第22-28页 |
| 3.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin分类 | 第22-24页 |
| 3.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatins在一些人类疾病中的作用 | 第24-28页 |
| 第二章 南美角蛙cystatin-cp表达菌株的构建 | 第28-40页 |
| 1、材料与方法 | 第28-36页 |
| 1.1 实验材料、试剂 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2、结果与分析 | 第36-38页 |
| 2.1 南美角蛙皮肤总RNA琼脂糖电泳 | 第36页 |
| 2.2 南美角蛙皮肤cDNA文库琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 2.3 含有酶切位点和甲酸切割位点的cystatin-cp目的基因片段电泳 | 第37页 |
| 2.4 pET-32a(+)质粒酶切前后及重组质粒电泳图 | 第37-38页 |
| 2.5 cystatin-cp成熟肽序列的预测 | 第38页 |
| 3、本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 南美角蛙半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin-cp原核表达及活性研究 | 第40-50页 |
| 1、目标蛋白的分离纯化 | 第40-41页 |
| 1.1 融合表达菌株cystatin-cp的诱导 | 第40页 |
| 1.2 菌体超声破碎 | 第40页 |
| 1.3 His-Tag融合蛋白的亲和层析 | 第40-41页 |
| 1.4 融合蛋白的甲酸切割 | 第41页 |
| 1.5 Sephadex G-50凝胶层析初步分离纯化目的蛋白 | 第41页 |
| 1.6 RP-HPLC分离纯化G-50活性峰 | 第41页 |
| 2、半胱氨酸蛋白酶抑制剂活性检测 | 第41-42页 |
| 3、结果与分析 | 第42-48页 |
| 3.1 融合表达菌株cystatin-cp经IPTG诱导后结果 | 第42-43页 |
| 3.2 超声破碎后融合蛋白具体位置的检测 | 第43页 |
| 3.3 融合蛋白的亲和柱纯化 | 第43-44页 |
| 3.4 融合蛋白的甲酸切割 | 第44-45页 |
| 3.5 Sephadex G-50凝胶层析分离纯化结果 | 第45-46页 |
| 3.6 RP-HPLC分离纯化G-50活性1峰 | 第46-47页 |
| 3.7 蛋白分子量的测定 | 第47页 |
| 3.8 cystatin-cp酶抑制剂活性测定 | 第47-48页 |
| 4、本章小结 | 第48-50页 |
| 全文总结 | 第50-52页 |
| 创新之处 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
