| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1. 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 木薯淀粉的应用 | 第9页 |
| 1.2 木薯淀粉生物合成途径及其关键基因的功能 | 第9-13页 |
| 1.2.1 木薯淀粉生物合成途径 | 第9-11页 |
| 1.2.2 淀粉合成途径关键基因的功能 | 第11-13页 |
| 1.3 转录因子对淀粉生物合成过程中多个关键基因的调节 | 第13页 |
| 1.4 转录因子 | 第13-16页 |
| 1.4.1 MYB类转录因子 | 第14页 |
| 1.4.2 bHLH类转录因子 | 第14-15页 |
| 1.4.3 bZIP类转录因子 | 第15页 |
| 1.4.4 WRKY类转录因子 | 第15-16页 |
| 1.5 顺式作用元件 | 第16-18页 |
| 1.5.1 启动子 | 第16-17页 |
| 1.5.2 增强子与沉默子 | 第17-18页 |
| 1.5.3 应答元件 | 第18页 |
| 1.6 酵母单杂交技术研究及应用进展 | 第18-22页 |
| 1.6.1 酵母单杂交技术的原理及优缺点 | 第18-20页 |
| 1.6.2 SMART技术 | 第20-21页 |
| 1.6.3 酿酒酵母的转化 | 第21-22页 |
| 1.6.4 酵母单杂技术的发展 | 第22页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-44页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22-23页 |
| 2.1.2 质粒及菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 试剂 | 第23页 |
| 2.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 2.3 MeSSS在木薯块根与功能叶中的表达分析 | 第24页 |
| 2.3.1 MeSSS基因同源性分析 | 第24页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第24页 |
| 2.3.3 MeSSS荧光定量PCR | 第24页 |
| 2.4 MeSSS上游启动子序列的扩增 | 第24-28页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.4.2 木薯KU50基因组DNA提取 | 第25页 |
| 2.4.3 PCR扩增 | 第25页 |
| 2.4.4 PCR胶回收 | 第25-26页 |
| 2.4.5 连接与转化 | 第26页 |
| 2.4.6 菌落PCR鉴定和阳性菌株保存 | 第26-27页 |
| 2.4.7 pMD19T-MeSSSⅣ质粒提取 | 第27页 |
| 2.4.8 MeSSSⅣ启动子上游序列分析 | 第27-28页 |
| 2.5 MeSSSⅣ启动子功能鉴定 | 第28-32页 |
| 2.5.1 植物表达载体的构建及其农杆菌转化 | 第28-31页 |
| 2.5.2 农杆菌转化本氏烟草 | 第31-32页 |
| 2.5.3 pCAMBIA1381Z-MeSSSⅣ功能鉴定 | 第32页 |
| 2.6 pMeSSSⅣ-AbA载体的构建 | 第32-36页 |
| 2.6.1 MeSSSⅣ启动子重PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.6.2 PCR产物回收 | 第33页 |
| 2.6.3 连接与转化 | 第33页 |
| 2.6.4 菌落PCR、测序鉴定和阳性菌株保存 | 第33-34页 |
| 2.6.5 pMD19T-MeSSSⅣ-XK质粒提取与酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.6.6 pMD19T-MeSSSⅣ-XK纯化 | 第34页 |
| 2.6.7 pMD19T-MeSSSⅣ-XK质粒和pAbAi双酶切及酶切产物回收 | 第34-35页 |
| 2.6.8 pMeSSSⅣ-AbAi载体的连接、转化及阳性克隆的筛选 | 第35页 |
| 2.6.9 pMeSSSⅣ-AbAi质粒的提取 | 第35页 |
| 2.6.10 pMeSSSⅣ-AbAi和pAbAi质粒的线性化及回收 | 第35-36页 |
| 2.7 Y1HGold/pMeSSSⅣ-AbAi菌株的制备及AbA背景浓度的筛选 | 第36-37页 |
| 2.7.1 Y1HGold感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.7.2 pMeSSSⅣ-AbAi及pAbAi线性质粒转化Y1HGold感受态细胞 | 第36-37页 |
| 2.7.3 Y1HGold/pMeSSSⅣ-AbAi菌株的鉴定及保存 | 第37页 |
| 2.7.4 Y1HGold/pMeSSSⅣ-AbAi菌株AbAi背景浓度的筛选 | 第37页 |
| 2.8 木薯块根、功能叶SMARTⅢds-cDNA的制备 | 第37-42页 |
| 2.8.1 木薯块根、功能叶总RNA的提取 | 第37-39页 |
| 2.8.2 块根、功能叶mRNA的纯化 | 第39-40页 |
| 2.8.3 SMART Ⅲ ss-cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 2.8.4 LD-PCR | 第41页 |
| 2.8.5 SMART Ⅲds-cDNA的纯化 | 第41-42页 |
| 2.9 酵母单杂交文库筛选 | 第42-44页 |
| 2.9.1 pGADT7-Rec质粒的线性化 | 第42页 |
| 2.9.2 Y1HGold/pMeSSSⅣ-AbAi感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.9.3 酵母单杂交文库筛选 | 第42-43页 |
| 2.9.4 大肠杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-58页 |
| 3.1 MeSSS基因序列分析 | 第44页 |
| 3.2 MeSSS基因家族表达分析 | 第44-45页 |
| 3.3 MeSSSⅣ上游启动子序列扩增 | 第45-50页 |
| 3.3.1 MeSSSⅣ上游启动子的扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.2 MeSSSⅣ基因上游序列启动子分析 | 第46-50页 |
| 3.4 MeSSSⅣ启动子功能鉴定 | 第50-54页 |
| 3.4.1 植物表达载体的构建及转化 | 第51-52页 |
| 3.4.2 转基因烟草的获得 | 第52-53页 |
| 3.4.3 MeSSSⅣ启动子功能鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5 pMeSSSⅣ-AbAi载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.6 Y1HGold/pMeSSSⅣ-AbAi菌株的制备及AbA背景浓度的筛选 | 第55-57页 |
| 3.7 木薯块根、功能叶SMART Ⅲds-cDNA的制备 | 第57-58页 |
| 3.7.1 木薯块根、功能叶总RNA的提取 | 第57页 |
| 3.7.2 SMART Ⅲ ds-cDNA的合成与纯化 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 MeSSSⅣ启动子序列分析 | 第58-59页 |
| 4.2 启动子功能鉴定 | 第59页 |
| 4.3 DNA/蛋白质互作的研究方法 | 第59-60页 |
| 4.4 荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 5. 结论 | 第61页 |
| 6 下阶段研究工作 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-77页 |
| 附录1：相关试剂配制 | 第70-74页 |
| 附录2：缩略词表 | 第74-75页 |
| 附录3 载体图 | 第75-76页 |
| 附录4 引物序列 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
