| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 高血压 | 第11页 |
| 1.2 ACE与ACE抑制肽 | 第11-12页 |
| 1.3 抗氧化肽与高血压 | 第12-13页 |
| 1.4 功能性短肽的制备研究现状 | 第13-15页 |
| 1.4.1 ACE抑制肽 | 第13-15页 |
| 1.4.2 抗氧化肽 | 第15页 |
| 1.5 基因工程法制备ACE抑制肽 | 第15-18页 |
| 1.5.1 ACE抑制肽的表达 | 第15-16页 |
| 1.5.2 融合标签 | 第16-18页 |
| 1.5.3 大肠杆菌高密度发酵 | 第18页 |
| 1.6 高血压体外细胞模型 | 第18-19页 |
| 1.6.1 血管内皮细胞与高血压 | 第18页 |
| 1.6.2 氧化应激与高血压 | 第18-19页 |
| 1.7 课题意义及主要内容 | 第19-20页 |
| 1.7.1 课题意义 | 第19页 |
| 1.7.2 主要内容 | 第19-20页 |
| 第二章 重组ACE抑制肽与抗氧化肽基因工程菌的构建 | 第20-31页 |
| 2.1 材料与设备 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第21页 |
| 2.1.4 溶液与培养基配制 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 工程菌的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.2 融合蛋白6×His-SUMO-BPP-1可溶性表达 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 多聚体BPP-1及其基因的设计 | 第24-26页 |
| 2.3.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.3.3 测序鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 双酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.3.5 融合蛋白6×His-SUMO-BPP-1的表达鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.6 融合蛋白可溶性表达 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 重组基因工程菌高密度发酵研究 | 第31-41页 |
| 3.1 材料与设备 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第31页 |
| 3.1.3 培养基 | 第31-32页 |
| 3.2 试验方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 种子制备方法 | 第32页 |
| 3.2.2 摇瓶发酵 | 第32页 |
| 3.2.3 发酵罐发酵 | 第32-33页 |
| 3.2.4 分析方法 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-39页 |
| 3.3.1 种子生长过程曲线及种龄的确定 | 第33页 |
| 3.3.2 重组菌摇瓶发酵优化 | 第33-36页 |
| 3.3.3 重组菌在3L发酵罐上的高密度发酵研究 | 第36-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 融合蛋白纯化及BPP-1酶解寡肽体外生物活性研究 | 第41-56页 |
| 4.1 材料与设备 | 第41-42页 |
| 4.1.1 菌株 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第42页 |
| 4.1.4 溶液的配制 | 第42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 融合蛋白包涵体洗涤与溶解 | 第42-43页 |
| 4.2.2 融合蛋白纯化及复性 | 第43页 |
| 4.2.3 多聚体BPP-1酶切分离 | 第43页 |
| 4.2.4 多聚体BPP-1纯化及复性 | 第43页 |
| 4.2.5 多聚体BPP-1的鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.6 BPP-1体外模拟消化 | 第44页 |
| 4.2.7 蛋白浓度的测定 | 第44页 |
| 4.2.8 多肽浓度的测定 | 第44页 |
| 4.2.9 体外抗氧化活性的测定 | 第44-45页 |
| 4.2.10 体外ACE抑制活性测定 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-53页 |
| 4.3.1 融合蛋白包涵体的变性溶解 | 第46页 |
| 4.3.2 融合蛋白的纯化及复性 | 第46-48页 |
| 4.3.3 多聚体BPP-1的酶切分离 | 第48页 |
| 4.3.4 多聚体BPP-1的纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.5 多聚体BPP-1质谱鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.6 BPP-1体外模拟消化 | 第50-51页 |
| 4.3.7 BPP-1酶解寡肽体外抗氧化活性 | 第51-53页 |
| 4.3.8 BPP-1酶解寡肽体外ACE抑制活性 | 第53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 4.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 BPP-1酶解寡肽对H_2O_2诱导EA.hy926细胞氧化损伤保护作用研究 | 第56-67页 |
| 5.1 材料与设备 | 第56-57页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第56页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 5.1.3 主要仪器与设备 | 第57页 |
| 5.1.4 溶液的配制 | 第57页 |
| 5.2 试验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.1 EA.hy926细胞的培养 | 第57-58页 |
| 5.2.2 细胞活性的测定 | 第58页 |
| 5.2.3 细胞凋亡的测定 | 第58-59页 |
| 5.2.4 血管舒张因子NO和收缩因子ET-1含量的测定 | 第59页 |
| 5.2.5 氧化应激产物ROS和MDA的测定 | 第59-60页 |
| 5.2.6 数据分析 | 第60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-65页 |
| 5.3.1 EA.hy926细胞氧化损伤模型的建立 | 第60页 |
| 5.3.2 BPP-1酶解寡肽对细胞氧化损伤细胞活性的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.3 BPP-1酶解寡肽对细胞形态的影响 | 第61-62页 |
| 5.3.4 BPP-1酶解寡肽对细胞凋亡的影响 | 第62页 |
| 5.3.5 BPP-1酶解寡肽对血管舒缩因子NO和ET-1含量的影响 | 第62-63页 |
| 5.3.6 BPP-1酶解寡肽对ROS和MDA含量的影响 | 第63-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-66页 |
| 5.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 全文结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
