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水稻果胶裂解酶基因DEL1的克隆和功能研究

摘要第7-9页
Abstract第9-11页
英文缩略表第12-14页
第一章 文献综述第14-33页
    1.1 细胞壁的结构与功能第14-16页
        1.1.1 胞间层和初生细胞壁第15-16页
        1.1.2 次生细胞壁第16页
    1.2 果胶的研究进展第16-25页
        1.2.1 果胶的结构第16-22页
        1.2.2 果胶的连接方式第22-23页
        1.2.3 果胶降解酶第23-25页
    1.3 果胶裂解酶的研究进展第25-29页
        1.3.1 果胶裂解酶的催化机制第25-27页
        1.3.2 果胶裂解酶基因在植物中的研究第27-29页
    1.4 细胞壁生物技术研究第29-31页
        1.4.1 细胞壁免疫组织化学技术第29-30页
        1.4.2 基于ELISA的糖组学分析第30-31页
        1.4.3 原子力显微镜第31页
    1.5 本研究目的和意义第31-33页
第二章 实验材料和方法第33-52页
    2.1 实验材料第33页
        2.1.1 材料来源第33页
    2.2 试验试剂与仪器第33-34页
        2.2.1 试剂第33-34页
        2.2.2 仪器第34页
        2.2.3 菌株和载体第34页
    2.3 试验方法第34-52页
        2.3.1 农艺性状考查第34页
        2.3.2 遗传群体的构建及分析第34-35页
        2.3.3 细胞学分析第35-36页
        2.3.4 透射电镜分析第36页
        2.3.5 DNA的提取及PCR第36-37页
        2.3.6 DEL1的图位克隆第37-38页
        2.3.7 载体构建及遗传转化第38-41页
        2.3.8 水稻转基因第41-42页
        2.3.9 基因的进化分析第42页
        2.3.10 水稻总RNA的提取、反转录及qRT-PCR第42-44页
        2.3.11 GUS组织化学分析第44-45页
        2.3.12 细胞壁中性单糖及纤维素含量测定第45页
        2.3.13 糖醛酸及半纤维素含量测定第45-46页
        2.3.14 果胶裂解酶(PEL)活测定第46-47页
        2.3.15 免疫组织化学分析第47页
        2.3.16 流式细胞仪分析第47页
        2.3.17 叶片衰老生理指标测定第47-51页
        2.3.18 TUNEL检测叶片PCD第51页
        2.3.19 转录组实验第51-52页
第三章 结果与分析第52-78页
    3.1 del1植株矮小第52-57页
        3.1.1 del1表现出发育受阻第52-54页
        3.1.2 del1茎变短、变细第54-55页
        3.1.3 del1细胞数目减少第55-56页
        3.1.4 del1细胞周期进程受到阻碍第56-57页
    3.2 del1叶片衰老第57-62页
        3.2.1 del1叶片表现出早衰表型第57-58页
        3.2.2 del1叶绿体发育异常第58-59页
        3.2.3 del1叶片活性氧积累第59-60页
        3.2.4 del1引起抗氧化及衰老相关基因表达升高第60-61页
        3.2.5 del1加速叶片程序化死亡第61-62页
    3.3 del1由单隐性核基因控制第62-63页
    3.4 DEL1的图位克隆第63-64页
    3.5 转基因功能验证第64-66页
    3.6 DEL1编码一个果胶裂解酶前体蛋白第66-67页
    3.7 DEL1的进化分析第67-68页
    3.8 DEL1的表达模式第68-70页
    3.9 DEL1突变导致果胶裂解酶活性下降并改变细胞壁的组成和结构第70-72页
    3.10 DEL1突变导致同聚半乳糖醛酸甲酯化程度升高第72-74页
    3.11 转录组分析显示del1中许多与细胞壁和衰老相关基因表达发生显著变化第74-78页
第四章 讨论第78-81页
    4.1 DEL1通过改变细胞周期进程影响水稻正常发育第78页
    4.2 DEL1通过ROS的积累加速叶片衰老第78-79页
    4.3 可能引起DEL1表型的分子机制第79-81页
第五章 全文结论第81-82页
参考文献第82-98页
附录Ⅰ 常用试剂及培养基配方第98-107页
附录Ⅱ 作者简历及攻读学位期间研究成果第107-109页
致谢第109-111页

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