| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 阿尔茨海默病 | 第10-13页 |
| 1.1.1 阿尔茨海默病的发展 | 第10-11页 |
| 1.1.2 阿尔茨海默病的治疗 | 第11-13页 |
| 1.2 石杉碱甲(Huperzine A) | 第13-16页 |
| 1.2.1 石杉碱甲的主要来源 | 第13-15页 |
| 1.2.2 石杉碱甲的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.3 本研究的意义、研究内容和技术路线 | 第16-19页 |
| 1.3.1 研究意义 | 第16-17页 |
| 1.3.2 研究内容与技术路线 | 第17-19页 |
| 第二章 胶孢炭疽菌ES026赖氨酸脱羧酶基因（CgLDC）和铜胺氧化酶基因（CgCAO）的克隆和序列分析 | 第19-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基及试剂的配置 | 第21页 |
| 2.1.5 E.coli感受态制备 | 第21-22页 |
| 2.1.6 C.gloeosporioides ES026基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.1.7 CgLDC、CgCAO基因片段获得 | 第23-30页 |
| 2.1.8 CgLDC和CgCAO基因生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.1.9 CgLDC和CgCAO基因系统发育树构建 | 第30-31页 |
| 2.1.10 CgLDC和CgCAO蛋白理化性质预测 | 第31页 |
| 2.1.11 CgLDC和CgCAO蛋白结构域分析及 3D结构模拟 | 第31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-41页 |
| 2.2.1 CgLDC和CgCAO基因的分子克隆 | 第31-36页 |
| 2.2.2 CgLDC和CgCAO基因生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.2.3 CgLDC和CgCAO基因系统发育树构建 | 第36-37页 |
| 2.2.4 CgLDC和CgCAO蛋白理化性质预测 | 第37-40页 |
| 2.2.5 CgLDC和CgCAO蛋白结构域分析及 3D结构模拟 | 第40-41页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 胶孢炭疽菌ES026 CgLDC基因和CgCAO基因的体外原核表达与蛋白纯化 | 第42-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-49页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第42-43页 |
| 3.1.2 主要试剂、耗材 | 第43页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第43-44页 |
| 3.1.4 原核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| 3.1.5 CgLDC蛋白表达及纯化 | 第46-49页 |
| 3.1.6 CgCAO蛋白表达及纯化 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-53页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.2 CgLDC和CgCAO蛋白表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.3 CgLDC和CgCAO蛋白浓度的检测 | 第52-53页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 胶孢炭疽菌ES026 CgLDC和CgCAO体外酶活验证 | 第55-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第55页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 4.1.4 CgLDC和CgCAO蛋白体外酶促反应验证 | 第57-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-61页 |
| 4.2.1 CgLDC蛋白体外酶促活性 | 第58-59页 |
| 4.2.2 CgCAO蛋白体外酶促活性 | 第59-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 胶孢炭疽菌ES026 CgLDC基因和CgCAO基因体内过表达 | 第62-87页 |
| 5.1 材料与方法 | 第62-74页 |
| 5.1.1 试验菌株及质粒 | 第62-63页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第63-65页 |
| 5.1.3 培养基及试剂的配置 | 第65-67页 |
| 5.1.4 Gibson组装 | 第67页 |
| 5.1.5 CgLDC、CgCAO基因过表达载体的构建 | 第67-69页 |
| 5.1.6 根癌农杆菌EHA105菌液的制备 | 第69页 |
| 5.1.7 胶胞炭疽菌ES026孢子悬浮液的制备 | 第69-70页 |
| 5.1.8 Gibson组装 | 第70页 |
| 5.1.9 根癌农杆菌介导的转化 | 第70-71页 |
| 5.1.10 C.gloeosporioides ES026基因组DNA的提取 | 第71页 |
| 5.1.11 C.gloeosporioides ES026总RNA的提取 | 第71-72页 |
| 5.1.12 第一链cDNA的合成 | 第72页 |
| 5.1.13 石杉碱甲的提取方法 | 第72-73页 |
| 5.1.14 LC-MS检测 | 第73-74页 |
| 5.1.15 实时定量PCR（qRT-PCR） | 第74页 |
| 5.2 结果与分析 | 第74-85页 |
| 5.2.1 CgLDC、CgCAO基因过表达载体的构建 | 第74-79页 |
| 5.2.2 ES026孢子的制备 | 第79页 |
| 5.2.3 根癌农杆菌介导的转化子的PCR鉴定 | 第79-81页 |
| 5.2.4 实时定量PCR（qRT-PCR） | 第81-82页 |
| 5.2.5 LC-MS | 第82-85页 |
| 5.3 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 结论和展望 | 第87-89页 |
| 6.1 主要结论 | 第87页 |
| 6.2 展望 | 第87-88页 |
| 6.3 论文创新点 | 第88-89页 |
| 附录1 本实验所涉及到的引物序列 | 第89-90页 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表的论文 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
