中文摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
中文文摘 | 第6-9页 |
目录 | 第9-13页 |
绪论 | 第13-27页 |
1、牙齿发育 | 第13-27页 |
1. 哺乳动物牙齿发育过程 | 第13-16页 |
2. 哺乳动物牙齿发育机制 | 第16-24页 |
2.1 颅面神经嵴在牙齿早期发育中的作用 | 第16页 |
2.2 牙齿发育早期牙上皮与牙间充质相互作用 | 第16页 |
2.3 牙齿发育的分子机制 | 第16-24页 |
2.3.1 WNTs | 第16页 |
2.3.2 BMPs | 第16-17页 |
2.3.3 SHH | 第17-18页 |
2.3.4 FGFs | 第18-23页 |
2.3.5 信号通路间的交互作用 | 第23-24页 |
2、原位杂交 | 第24-25页 |
3、利用慢病毒进行过表达技术 | 第25-26页 |
4、研究意义 | 第26-27页 |
第1章 材料和方法 | 第27-43页 |
1.1 材料 | 第27-31页 |
1.1.1 材料来源 | 第27页 |
1.1.2 实验动物 | 第27页 |
1.1.3 细胞 | 第27页 |
1.1.4 菌株和质粒载体 | 第27页 |
1.1.5 主要实验仪器 | 第27-28页 |
1.1.6 主要实验试剂 | 第28页 |
1.1.7 常用培养基及缓冲液 | 第28-29页 |
1.1.8 原位杂交试剂 | 第29-31页 |
1.2 方法 | 第31-43页 |
1.2.1 人/小鼠牙胚总RNA的提取 | 第31-32页 |
1.2.2 总RNA反转为cDNA | 第32页 |
1.2.3 RT-PCR(Reverse transcription-PCR) | 第32-33页 |
1.2.4 Real-time PCR | 第33页 |
1.2.5 重组质粒构建 | 第33-35页 |
1.2.6 原位杂交 | 第35-38页 |
1.2.7 慢病毒的生产 | 第38-40页 |
1.2.7.1 大量提取慢病毒包装质粒 | 第38-39页 |
1.2.7.2 293T细胞的培养 | 第39页 |
1.2.7.3 磷酸钙法转染293T细胞产慢病毒 | 第39-40页 |
1.2.7.4 慢病毒上清液的浓缩 | 第40页 |
1.2.7.5 浓缩慢病毒滴度测定 | 第40页 |
1.2.8 嵌合体过表达/重组技术 | 第40-41页 |
1.2.8.1 E13.5小鼠牙胚间充质细胞的分离 | 第40页 |
1.2.8.2 慢病毒感染E13.5小鼠牙胚间充质细胞 | 第40-41页 |
1.2.8.3 E11.5小鼠牙胚上皮的分离 | 第41页 |
1.2.8.4 嵌合体重组 | 第41页 |
1.2.8.5 小鼠肾囊膜移植 | 第41页 |
1.2.8.6 嵌合体取材、固定、包埋及切片 | 第41页 |
1.2.9 HE(Hematoxylin and Eosin)和AZAN染色 | 第41-42页 |
1.2.10 石蜡切片免疫组化 | 第42-43页 |
第2章 结果 | 第43-65页 |
2.1 人类早期牙胚FGFs表达模式研究 | 第43-57页 |
2.1.1 人类早期牙胚FGFs表达模式的初步确定 | 第43-44页 |
2.1.2 人FGFs基因的克隆及探针制备 | 第44-45页 |
2.1.3 人类早期牙胚FGFs的表达模式检测 | 第45-57页 |
2.1.3.1 FGF1在人类早期牙胚的表达模式 | 第45-46页 |
2.1.3.2 FGF2在人类早期牙胚的表达模式 | 第46-48页 |
2.1.3.3 FGF3在人类早期牙胚的表达模式 | 第48-49页 |
2.1.3.4 FGF4在人类早期牙胚的表达模式 | 第49-50页 |
2.1.3.6 FGF7在人类早期牙胚的表达模式 | 第50-51页 |
2.1.3.7 FGF8在人类早期牙胚的表达模式 | 第51-53页 |
2.1.3.8 FGF9在人类早期牙胚的表达模式 | 第53-54页 |
2.1.3.9 FGF10在人类早期牙胚的表达模式 | 第54-55页 |
2.1.3.10 FGF15/19在人类早期牙胚的表达模式 | 第55-56页 |
2.1.3.11 FGF18在人类早期牙胚的表达模式 | 第56-57页 |
2.2 FGFs在哺乳动物牙齿发育功能的研究 | 第57-65页 |
2.2.1 慢病毒质粒载体的构建及慢病毒的制备 | 第57-59页 |
2.2.2 小鼠间充质分别过表达Fgf7,Fgf9,Fgf17和Fgf18体系的建立 | 第59-61页 |
2.2.3 Fgf7,Fgf9,Fgf17和Fgf18在小鼠牙齿发育功能的初步研究 | 第61-65页 |
2.2.3.1 Fgf7的过表达并未明显影响小鼠牙齿的发育 | 第61-62页 |
2.2.3.2 Fgf9的过表达并未明显影响小鼠牙齿的发育 | 第62页 |
2.2.3.3 Fgf17的过表达并未明显影响小鼠牙齿的发育 | 第62页 |
2.2.3.4 FgF18的达能够明显延缓小鼠牙齿的发育速率 | 第62-65页 |
第3章 分析与讨论 | 第65-71页 |
3.1 FGFs参与调控哺乳动物牙齿发育的调控 | 第65-68页 |
3.2 FGF18参与调控小鼠牙齿发育速率 | 第68-69页 |
3.3 研究人类牙齿发育特性的重要性 | 第69-71页 |
第4章 结论 | 第71-73页 |
4.1 FGFs参与调控哺乳动物牙齿发育的调控 | 第71页 |
4.2 FGF18参与调控小鼠牙齿发育速率 | 第71-73页 |
附录 | 第73-89页 |
附录1 基因和蛋白质符号说明 | 第73-74页 |
附录2 引物 | 第74-76页 |
附录3 质粒载体 | 第76-77页 |
附录4 测序报告单 | 第77-89页 |
参考文献 | 第89-99页 |
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第99-101页 |
致谢 | 第101-105页 |
个人简历 | 第105-107页 |