| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第11-25页 |
| 前言一 | 第11-21页 |
| 1 小反刍兽疫概述 | 第11-21页 |
| 1.1 病原学研究 | 第11-15页 |
| 1.1.1 PPR的分子生物学 | 第11-12页 |
| 1.1.2 核衣壳蛋白 | 第12-13页 |
| 1.1.3 磷蛋白 | 第13页 |
| 1.1.4 基质蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.5 融合蛋白 | 第14页 |
| 1.1.6 血凝素蛋白 | 第14-15页 |
| 1.1.7 大蛋白 | 第15页 |
| 1.2 PPRV复制 | 第15-16页 |
| 1.3 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.4 临床症状 | 第17-18页 |
| 1.5 PPRV疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.1 PPR弱毒疫苗 | 第18-19页 |
| 1.6 PPRV诊断技术 | 第19-21页 |
| 1.6.1 抗原检测 | 第19页 |
| 1.6.2 血清学诊断 | 第19-21页 |
| 前言二 | 第21-25页 |
| 1 概述 | 第21页 |
| 2 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第21-23页 |
| 3 杆状病毒表达系统应用进展 | 第23页 |
| 4 研究目的意义 | 第23-25页 |
| 第一部分：小反刍兽疫病毒CH/GDDG/2014株的全基因序列分析 | 第25-41页 |
| 引言 | 第25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| 1.1 病料、载体和菌种 | 第25页 |
| 1.2 试剂和试剂盒 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 1.5 主要分子生物学软件 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| 2.1 病毒基因组引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2 病毒培养及RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3 RT-PCR扩增条件 | 第29页 |
| 2.4 各片段PCR产物的回收与纯化 | 第29-30页 |
| 2.5 目的基因与载体连接 | 第30页 |
| 2.6 DH5α感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 2.7 连接产物转化感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.8 重组质粒的抽提 | 第31页 |
| 2.9 重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.10 各目的片段的测序分析 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 3.1 CH/GDDG/2014株全基因RT-PCR扩增结果 | 第34页 |
| 3.2 CH/GDDG/2014株全基因组序列测序结果 | 第34-35页 |
| 3.3 CH/GDDG/2014株与其它小反刍兽疫病毒株各结构基因同源性分析 | 第35-36页 |
| 3.4 小反刍兽疫病毒CH/GDDG/2014株基因组系统进化分析 | 第36-38页 |
| 4 讨论与结论 | 第38-41页 |
| 第二部分：小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达载体构建 | 第41-60页 |
| 引言 | 第41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-53页 |
| 1.1 材料 | 第41-44页 |
| 1.1.1 病毒、细胞和质粒 | 第41-42页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.1.3 常用试剂及缓冲液的配制 | 第42页 |
| 1.1.4 常用培养基的配制 | 第42-43页 |
| 1.1.5 SDS-PAGE和Western-Blot所需试剂和溶液 | 第43-44页 |
| 1.2 方法 | 第44-53页 |
| 1.2.1 引物的设计及PCR的扩增 | 第44页 |
| 1.2.2 表达PPRV-N重组穿梭载体的构建 | 第44-46页 |
| 1.2.3 重组杆状病毒杆粒的获得 | 第46-47页 |
| 1.2.4 重组杆状病毒杆粒的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 1.2.5 重组杆状病毒的获得 | 第48-50页 |
| 1.2.6 重组杆状病毒rBv-N以及表达产物的鉴定 | 第50页 |
| 1.2.7 表达产物的SDS分析 | 第50-52页 |
| 1.2.8 表达产物的Western blot鉴定 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-56页 |
| 2.1 目的基因的扩增 | 第53页 |
| 2.2 重组转移载体pFastBacTMHTB-N的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 重组杆状病毒杆粒Bacmid-N的PCR鉴定 | 第54页 |
| 2.4 重组杆状病毒接种Sf9细胞后产生的细胞病变 | 第54-55页 |
| 2.5 重组杆状病毒rBv-N的PCR鉴定 | 第55页 |
| 2.6 表达产物的鉴定 | 第55-56页 |
| 2.6.1 重组病毒的SDS-PAGE及Western blot检测鉴定 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-60页 |
| 3.1 目的基因的选择 | 第56-57页 |
| 3.2 杆状病毒表达系统的选择 | 第57-58页 |
| 3.3 研究意义 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录A: PPRV(CH/GDDG/2014毒株)全基因核酸序列测序结果： | 第68-72页 |
| 附录B：pMD19-T Simple Vector图谱： | 第72-73页 |
| 附录C：pFastBacTMHTA Vector图谱： | 第73-74页 |
| 附录D: 攻读硕士期间发表的相关学术论文： | 第74页 |
