| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-15页 |
| 1.1.1 流感病毒概述 | 第12页 |
| 1.1.2 流感病毒的结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 禽流感病毒理化特性 | 第13页 |
| 1.1.4 禽流感流行特点 | 第13页 |
| 1.1.5 禽流感的临床症状和病理变化 | 第13-14页 |
| 1.1.6 禽流感的诊断与预防 | 第14页 |
| 1.1.7 水禽禽流感研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 miRNA | 第15-17页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第15页 |
| 1.2.2 miRNA与禽流感病毒 | 第15-16页 |
| 1.2.3 miRNA的应用前景 | 第16-17页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 病毒、质粒和细胞 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 部分试剂配方 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 鸭胚成纤维细胞（DEF）制备 | 第19-20页 |
| 2.2.2 DEF的转染 | 第20页 |
| 2.2.3 DEF感染实验 | 第20页 |
| 2.2.4 细胞总RNA抽提 | 第20页 |
| 2.2.5 RNA质量鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.6 逆转录 | 第21页 |
| 2.2.7 Hiseq深度测序 | 第21页 |
| 2.2.8 小RNA的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2.2.9 基因组比对 | 第22页 |
| 2.2.10 新miRNA预测 | 第22页 |
| 2.2.11 miRNA差异分析 | 第22页 |
| 2.2.12 miRNA靶基因预测 | 第22页 |
| 2.2.13 差异表达的mi RNA的GO富集分析 | 第22页 |
| 2.2.14 miRNA表达丰度测定 | 第22-24页 |
| 2.2.15 miRNA差异分析荧光定量引物设计 | 第24页 |
| 2.2.16 目的片段扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.17 凝胶产物回收 | 第25页 |
| 2.2.18 DNA片段的连接与转化 | 第25页 |
| 2.2.19 目的片段序列测定 | 第25-26页 |
| 2.2.20 转染质粒质粒抽提 | 第26-27页 |
| 2.2.21 荧光素酶活性检测 | 第27页 |
| 2.2.22 DEF的收集和裂解 | 第27页 |
| 2.2.23 Western blot检测 | 第27页 |
| 2.2.24 统计学分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-42页 |
| 3.1 RNA样品制备 | 第28-29页 |
| 3.2 高通量数据分析 | 第29-33页 |
| 3.2.1 数据质量及长度分布 | 第29页 |
| 3.2.2 已知mi RNA比对 | 第29-30页 |
| 3.2.3 新miRNA预测 | 第30-32页 |
| 3.2.4 miRNA的差异分析 | 第32页 |
| 3.2.5 差异表达的已知miRNA的靶基因预测 | 第32页 |
| 3.2.6 差异表达的已知miRNA的GO富集分析 | 第32-33页 |
| 3.3 DK383感染DEF后IL-12 表达情况 | 第33-34页 |
| 3.4 调控IL-12 表达的候选miRNA筛选 | 第34-35页 |
| 3.5 miR-6125 对IL-12 表达的调控作用研究 | 第35-37页 |
| 3.6 IL-12m RNA与miR-6125 的靶向关系验证 | 第37-38页 |
| 3.7 miR-6125 的调控作用研究 | 第38-42页 |
| 4 讨论与结论 | 第42-45页 |
| 4.1 DK383对水禽miRNA表达谱影响 | 第42页 |
| 4.2 miR-6125对细胞因子表达的调节 | 第42-43页 |
| 4.3 miR-6125对禽流感病毒复制的影响 | 第43-45页 |
| 全文总结 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录A pCI-neo质粒 | 第52-53页 |
| 附录B psi-CHECK2质粒 | 第53-54页 |
| 附表1 差异表达的已知miRNA | 第54-58页 |
| 发表文章 | 第58页 |
