| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词简表 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 漆酶简介 | 第10-14页 |
| 1.1.1 漆酶的催化特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 漆酶的来源 | 第11页 |
| 1.1.3 耐热细茵漆酶研究现状 | 第11-13页 |
| 1.1.4 黏细菌、古菌漆酶基因筛选策略 | 第13页 |
| 1.1.5 重组酶表达体系的选择 | 第13-14页 |
| 1.2 本研究的研究意义及主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 潜在黏细菌漆酶序列筛选 | 第16-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.1 软件 | 第16页 |
| 2.1.2 数据库 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 模板漆酶序列的选择 | 第16页 |
| 2.2.2 在数据库中筛选有蛋白序列信息的黏细菌基因组 | 第16-17页 |
| 2.2.3 用HMMER 3.0对黏细菌进行全蛋白质组比对 | 第17-18页 |
| 2.2.4 用Clustal X筛选有四个铜离子结合区的候选漆酶序列 | 第18页 |
| 2.3 实验结果 | 第18-30页 |
| 2.3.1 候选黏细菌漆酶序列的筛选 | 第18-19页 |
| 2.3.2 用HMMER 3.0对黏细菌进行全蛋白质组比对 | 第19-21页 |
| 2.3.3 用Clustal X筛选有四个铜离子结合区的候选漆酶序列 | 第21-23页 |
| 2.3.4 用MEGA 6构建系统分类树状图 | 第23-26页 |
| 2.3.5 用Clustal W对候选漆酶与真菌、细菌多序列比 | 第26-28页 |
| 2.3.6 确定目地黏细菌潜在漆酶序列 | 第28-29页 |
| 2.3.7 人工合成目地黏细菌潜在漆酶序列及异源表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 黏细菌潜在漆酶表达及SC-2酶学性质研究 | 第32-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 主要生化试剂和酶 | 第32-33页 |
| 3.1.2 主要溶液的配制 | 第33页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 黏细菌漆酶表达体系的构建 | 第34页 |
| 3.2.2 重组酶的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.3 漆酶底物特异性 | 第35页 |
| 3.2.4 重组酶的活性测定 | 第35页 |
| 3.2.5 重组酶的最适反应温度和温度稳定性 | 第35页 |
| 3.2.6 重组酶的最适pH值和pH稳定性 | 第35-36页 |
| 3.2.7 金属离子对重组酶活性的影响 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-41页 |
| 3.3.1 重组酶的分离纯化及其性质分析 | 第36-37页 |
| 3.3.2 rSC-2表观分子量 | 第37-38页 |
| 3.3.3 温度对rSC-2活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.4 rSC-2热稳定性分析 | 第39页 |
| 3.3.5 pH对rSC-2活性的影响 | 第39页 |
| 3.3.6 rSC-2的pH稳定性 | 第39-40页 |
| 3.3.7 金属离子对rSC-2活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 古菌潜在漆酶的筛选 | 第42-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 4.1.1 软件和数据库 | 第42页 |
| 4.1.2 主要生化试剂和酶 | 第42-43页 |
| 4.1.3 培养基和溶剂的配制 | 第43页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第43-44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-51页 |
| 4.2.1 模板漆酶序列的选择 | 第44页 |
| 4.2.2 用模板漆酶序列比对古菌基因组,得到潜在古菌漆酶序列 | 第44页 |
| 4.2.3 潜在古菌漆酶的基因合成 | 第44-45页 |
| 4.2.4 糖基化位点及双精氨酸转运途径预测 | 第45页 |
| 4.2.5 Ppic9k载体构建 | 第45-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-60页 |
| 4.3.1 潜在古菌漆酶序列的筛选 | 第51-53页 |
| 4.3.2 古菌潜在漆酶表达及活性检测 | 第53-54页 |
| 4.3.3 潜在古菌漆酶基因的获取 | 第54-55页 |
| 4.3.4 目的片段连T后阳性重组子的筛选与鉴定 | 第55页 |
| 4.3.5 载体Ppic9k和5个目标片段进行酶切(Avr Ⅱ和Not Ⅰ) | 第55-57页 |
| 4.3.6 功能板筛选具有ABTS活性的潜在古菌漆酶 | 第57-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第73页 |
