| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 红笛鲷的研究现状 | 第9页 |
| 1.2 红笛鲷免疫相关基因的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.3 鱼类的免疫应答机制 | 第10-11页 |
| 1.3.1 先天性免疫 | 第10页 |
| 1.3.2 适应性免疫 | 第10-11页 |
| 1.4 TRAFs蛋白家族 | 第11页 |
| 1.5. TRAF3的简介 | 第11页 |
| 1.6 TRAF3在免疫信号通路中的作用机制 | 第11-14页 |
| 1.6.1 TRAF3在TNF-R超家族信号中的作用 | 第11-12页 |
| 1.6.2 TRAF3在TLRs信号中的作用 | 第12-13页 |
| 1.6.3 TRAF3在NLR信号中的作用 | 第13页 |
| 1.6.4 TRAF3在RLR信号中的作用 | 第13-14页 |
| 1.6.5 TRAF3在细胞因子受体信号中的作用 | 第14页 |
| 1.6.6 TARF3在水生动物中的研究进展 | 第14页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 2 红笛鲷TRAF3基因的克隆及生物信息学分析 | 第16-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.1 试验用鱼 | 第16页 |
| 2.1.2 质粒载体与受体菌株 | 第16页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第16页 |
| 2.1.4 其他溶液和试剂 | 第16页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.6 生物信息学分析所用软件及网站 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-21页 |
| 2.2.1 红笛鲷饲养及组织样品采集 | 第16-17页 |
| 2.2.2 总RNA提取 | 第17页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第17页 |
| 2.2.4 Ls-TRAF3全长的扩增 | 第17-21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.3.1 Ls-TRAF3全长的扩增结果 | 第21页 |
| 2.3.2 Ls-TRAF3的序列分析 | 第21-22页 |
| 2.3.3 Ls-TRAF3氨基酸同源性及系统进化分析 | 第22-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 3 Ls-TRAF3在红笛鲷中的表达差异分析 | 第26-32页 |
| 3.1 实验试剂 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 3.2.1 免疫原的制备 | 第26页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第26页 |
| 3.2.3 总RNA的提取及DNaseI消化 | 第26-27页 |
| 3.2.4 cDNA一链的合成 | 第27页 |
| 3.2.5 引物设计 | 第27-28页 |
| 3.2.6 Quantitiative Real-Time PCR(qRT-PCR) | 第28页 |
| 3.2.7 数据统计及分析 | 第28页 |
| 3.3 实验结果 | 第28-30页 |
| 3.3.1 健康红笛鲷体内TRAF3基因的组织表达差异 | 第28-29页 |
| 3.3.2 红笛鲷TRAF3基因在病原刺激条件下的表达模式分析 | 第29页 |
| 3.3.3 红笛鲷TRAF3及相关基因在白细胞中的表达模式分析 | 第29-30页 |
| 3.4 讨论 | 第30-32页 |
| 4 酵母双杂交验证Ls-TRAF3蛋白和Ls-CD40蛋白的相互作用 | 第32-39页 |
| 4.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 4.1.1 载体和表达菌株 | 第32页 |
| 4.1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 4.2.1 重组载体的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.2 重组质粒的转化和其毒性检测 | 第34-36页 |
| 4.3 实验结果 | 第36-37页 |
| 4.3.1 重组酵母表达载体的鉴定 | 第36页 |
| 4.3.2 重组质粒的毒性及自激活性检测 | 第36页 |
| 4.3.3 Ls-TRAF3和Ls-CD40互作情况的检测 | 第36-37页 |
| 4.4 讨论 | 第37-39页 |
| 5 Ls-TRAF3对NF-κB信号的影响 | 第39-46页 |
| 5.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 5.1.1 质粒载体真核表达质粒 | 第39页 |
| 5.1.2 试剂盒 | 第39-40页 |
| 5.1.3 其他实验材料 | 第40-41页 |
| 5.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第41页 |
| 5.2.2 PCR扩增与重组质粒的构建 | 第41-42页 |
| 5.2.3 去内毒素质粒的提取 | 第42页 |
| 5.2.4 NF-κB报告基因的活性检测 | 第42页 |
| 5.3 实验结果 | 第42-44页 |
| 5.3.1 PCR扩增与重组质粒构建 | 第42-43页 |
| 5.3.2 过表达Ls-TRAF3对NF-κB信号的影响 | 第43-44页 |
| 5.3.3 TRAF3的各结构域对NF-κB信号的影响 | 第44页 |
| 5.4 讨论 | 第44-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 导师简介 | 第60页 |
