| 名词简写 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 综述 | 第10-15页 |
| 1 重组 | 第10页 |
| 1.1 基因重组 | 第10页 |
| 1.2 同源重组 | 第10页 |
| 2 重组工程 | 第10-11页 |
| 2.1 重组工程的定义 | 第10-11页 |
| 2.2 重组工程的机理 | 第11页 |
| 3 重组工程的研究进展 | 第11-12页 |
| 4 点突变的研究进展 | 第12-13页 |
| 5 神经氨酸 | 第13-14页 |
| 5.1 N-乙酰-D-神经氨酸的制备 | 第13页 |
| 5.2 nanA基因 | 第13-14页 |
| 6 ccdB基因 | 第14-15页 |
| 第2章 重组工程介导的基因突变 | 第15-40页 |
| 1 实验材料 | 第16-20页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第16-18页 |
| 1.2 引物的合成以及测序 | 第18-19页 |
| 1.3 实验仪器和设备 | 第19页 |
| 1.4 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.5 溶液及培养基配制 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.1 常规分子生物学操作方法 | 第20-22页 |
| 2.2 Red感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 2.3 重组菌株诱导重组酶表达的重组体系 | 第23-24页 |
| 2.4 基于染色体的重组工程菌株的基因无痕敲除方法 | 第24-25页 |
| 2.5 硫代磷酸寡核苷酸转化LS2064 | 第25页 |
| 2.6 S208G突变片段和pLSl22共转化LS2058 | 第25-26页 |
| 2.7 长同源臂突变质粒的构建 | 第26页 |
| 2.8 长同源臂突变片段和pLS122共转化LS2058 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-39页 |
| 3.1 基于染色体的重组工程菌株中的基因敲除 | 第27-30页 |
| 3.2 重组菌株基因组修饰后对定点突变的影响 | 第30-33页 |
| 3.3 硫代磷酸寡核苷酸对突变效率的影响 | 第33-34页 |
| 3.4 50HAS208G突变片段和pLS122共转化LS2058 | 第34-35页 |
| 3.5 长同源臂突变质粒的构建 | 第35-37页 |
| 3.6 长同源臂的突变片段和pLS122共转化对突变效率的影响 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第3章 新型的容纳毒性基因ccdB菌株的构建 | 第40-49页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 1.2 引物的合成以及测序 | 第41-42页 |
| 1.3 实验仪器和试剂、溶液及培养基配制 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-43页 |
| 2.1 常规分子生物学操作方法 | 第42页 |
| 2.2 gyrA462 oligo和pMK2010共转化实现GyrA462点突变 | 第42-43页 |
| 2.3 诱导自消除质粒的构建 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-47页 |
| 3.1 寡核苷酸和pMK2010共转化实现GyrA462突变 | 第43-44页 |
| 3.2 质粒的消除 | 第44-45页 |
| 3.3 诱导自消除质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3.4 E.coli DB3.1 λpir 和LS027转化效率的比较 | 第46-47页 |
| 3.5 E.coli DB3.1 λpir 和LS027中R6K复制子质粒的拷贝数的比较 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 在读期间发表的学术论文及专利 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
