| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 S-腺苷同型半胱氨酸概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 S-腺苷同型半胱氨酸分子结构 | 第10页 |
| 1.1.2 S-腺苷同型半胱氨酸的应用 | 第10页 |
| 1.1.3 S-腺苷同型半胱氨酸的生产制备方法研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 乳酸脱氢酶 | 第11-13页 |
| 1.2.1 乳酸脱氢酶的来源 | 第11-12页 |
| 1.2.2 乳酸脱氢酶的催化机理 | 第12页 |
| 1.2.3 乳酸脱氢酶的应用价值 | 第12-13页 |
| 1.3 嗜热酶研究进展 | 第13页 |
| 1.4 辅酶再生研究进展 | 第13-14页 |
| 1.5 研究意义及目标 | 第14页 |
| 1.6 研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料和方法 | 第16-27页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-27页 |
| 2.2.1 基因操作 | 第18-19页 |
| 2.2.2 琼脂糖电泳胶回收DNA片断和质粒抽提 | 第19页 |
| 2.2.3 DNA磷酸化及连接反应 | 第19页 |
| 2.2.4 DNA引物设计及合成 | 第19-20页 |
| 2.2.5 目的基因的扩增 | 第20页 |
| 2.2.6 重组表达质粒pHsh-sahase和pHsh-ldh的构建 | 第20页 |
| 2.2.7 重组菌的培养及重组酶的诱导表达 | 第20-21页 |
| 2.2.8 重组酶的纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.8.1 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.8.2 重组乳酸脱氢酶的纯化 | 第22页 |
| 2.2.9 重组酶的性质分析 | 第22-23页 |
| 2.2.9.1 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶性质分析 | 第22-23页 |
| 2.2.9.2 重组乳酸脱氢酶酶性质分析 | 第23页 |
| 2.2.10 重组酶的酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.10.1 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.10.2 乳酸脱氢酶酶活测定 | 第24页 |
| 2.2.11 蛋白质浓度的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.12 酶法制备S-腺苷同型半胱氨酸 | 第25页 |
| 2.2.12.1 S-腺苷同型半胱氨酸的检测 | 第25页 |
| 2.2.12.2 用S-腺苷同型半胱氨酸水解酶生产S-腺苷同型半胱氨酸 | 第25页 |
| 2.2.12.3 用乳酸脱氢酶作为辅酶再生系统生产S-腺苷同型半胱氨酸 | 第25页 |
| 2.2.13 辅酶再生系统反应的条件的优化 | 第25-27页 |
| 2.2.13.1 最适反应温度的测定 | 第25页 |
| 2.2.13.2 最适反应pH的测定 | 第25页 |
| 2.2.13.3 最适酶量比的测定 | 第25-27页 |
| 第三章 结果 | 第27-45页 |
| 3.1 重组表达质粒的构建 | 第27-30页 |
| 3.1.1 重组表达质粒pHsh-sahase的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.2 重组表达质粒pHsh-ldh的构建 | 第28-30页 |
| 3.2 重组酶在大肠杆菌中的重组表达 | 第30-32页 |
| 3.2.1 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶在大肠杆菌中的重组表达 | 第30页 |
| 3.2.2 重组乳酸脱氢酶酶在大肠杆菌中的重组表达 | 第30-32页 |
| 3.3 重组酶的酶学性质 | 第32-41页 |
| 3.3.1 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的酶学性质 | 第32-35页 |
| 3.3.1.1 辅酶NAD浓度对重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的酶活性影响 | 第32-33页 |
| 3.3.1.2 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的最适反应pH | 第33-34页 |
| 3.3.1.3 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的最适反应温度 | 第34-35页 |
| 3.3.1.4 重组S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的温度稳定性 | 第35页 |
| 3.3.2 重组乳酸脱氢酶的酶学性质 | 第35-41页 |
| 3.3.2.1 重组乳酸脱氢酶酶的最适反应时间 | 第36页 |
| 3.3.2.2 重组乳酸脱氢酶的最适反应pH | 第36-37页 |
| 3.3.2.3 重组乳酸脱氢酶的最适反应温度 | 第37页 |
| 3.3.2.4 重组乳酸脱氢酶的pH稳定性 | 第37-38页 |
| 3.3.2.5 重组乳酸脱氢酶的温度稳定性 | 第38-39页 |
| 3.3.2.6 重组乳酸脱氢酶的动力学参数K_m | 第39-40页 |
| 3.3.2.7 金属离子及抑制剂对重组乳酸脱氢酶活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 酶法生产S-腺苷同型半胱氨酸 | 第41-45页 |
| 3.4.1 产物的鉴定 | 第41页 |
| 3.4.2 用S-腺苷同型半胱氨酸水解酶生产S-腺苷同型半胱氨酸 | 第41-42页 |
| 3.4.3 用乳酸脱氢酶作为辅酶再生系统生产S-腺苷同型半胱氨酸 | 第42-45页 |
| 3.4.3.1 用乳酸脱氢酶构建辅酶NAD再生系统 | 第42-43页 |
| 3.4.3.2 最适生产条件下S-腺苷同型半胱氨酸水解酶与乳酸脱氢酶的稳定性 | 第43-44页 |
| 3.4.3.3 辅酶再生系统中乳酸脱氢酶最适酶量 | 第44-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-48页 |
| 主要结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
