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乙酰化熊果苷的酶法制备及其生物活性的研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
缩略词索引表第9-16页
第1章 绪论第16-30页
    1.1 植物多酚的研究与应用第16-18页
        1.1.1 植物多酚的简介第16页
        1.1.2 植物多酚的结构和分类第16-17页
        1.1.3 植物多酚的功能第17-18页
        1.1.4 植物多酚在实际应用中的问题第18页
    1.2 植物多酚衍生化方法第18-21页
        1.2.1 物理方法第18-19页
        1.2.2 化学合成法第19-20页
        1.2.3 酶促合成法第20-21页
    1.3 非水相酶催化反应概述第21-22页
        1.3.1 非水相酶催化反应的特点第21页
        1.3.2 非水相体系中酶催化反应的影响因素第21-22页
        1.3.3 非水相反应体系中酶催化反应的应用前景第22页
    1.4 微波辐射偶联非水相酶催化技术第22-24页
        1.4.1 微波效应第22页
        1.4.2 微波加热对非水相酶促反应初速度的影响第22-23页
        1.4.3 微波加热对非水相酶促反应产率的影响第23页
        1.4.4 微波加热对酶的选择性、结构和稳定性的影响第23-24页
    1.5 熊果苷概述第24页
    1.6 熊果苷的应用研究进展第24-27页
        1.6.1 美白亮肤作用第24-25页
        1.6.2 抗炎抑菌作用第25页
        1.6.3 镇咳、祛痰、平喘第25-26页
        1.6.4 抗氧化作用第26页
        1.6.5 抗肿瘤作用第26-27页
        1.6.6 保护放射物诱导细胞凋亡第27页
    1.7 熊果苷存在的问题及衍生化研究第27-28页
    1.8 本研究的立题背景、研究意义和主要研究内容第28-30页
第2章 熊果苷非水相酶促乙酰化反应的研究第30-44页
    2.1 仪器与材料第31-32页
        2.1.1 主要仪器第31页
        2.1.2 材料与试剂第31页
        2.1.3 酶第31-32页
    2.2 实验方法第32页
        2.2.1 熊果苷的乙酰化反应第32页
        2.2.2 水活度的设定(a_w)第32页
        2.2.3 分析方法第32页
        2.2.4 熊果苷衍生物的结构鉴定第32页
    2.3 结果和讨论第32-40页
        2.3.1 酶源对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第32-33页
        2.3.2 酰基供体对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第33-34页
        2.3.3 反应溶剂对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第34-35页
        2.3.4 水活度对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第35-36页
        2.3.5 温度对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第36-38页
        2.3.6 加酶量对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第38-39页
        2.3.7 熊果苷非水相酶促乙酰化反应的时间进程第39-40页
    2.4 熊果苷乙酰化衍生物的确证第40-42页
        2.4.1 RPTLC法确认熊果苷乙酰化衍生物第40-41页
        2.4.2 HPLC法确认熊果苷乙酰化衍生物第41-42页
        2.4.3 核磁共振法结构鉴定熊果苷乙酰化衍生物第42页
    2.5 本章小结第42-44页
第3章 响应面法优化微波辅助熊果苷非水相酶促乙酰化反应的研究第44-58页
    3.1 仪器与材料第44-45页
        3.1.1 主要仪器第44-45页
        3.1.2 材料与试剂第45页
    3.2 实验方法第45-46页
        3.2.1 微波辅助熊果苷酶促乙酰化催化反应第45-46页
        3.2.2 分析方法第46页
    3.3 实验设计第46页
        3.3.1 逐一单因素实验设计第46页
        3.3.2 Box-Behnken设计第46页
    3.4 结果和讨论第46-50页
        3.4.1 微波加热处理对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第46-47页
        3.4.2 微波功率对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第47-48页
        3.4.3 微波温度对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第48-49页
        3.4.4 微波加热时间对熊果苷非水相酶促乙酰化反应的影响第49-50页
    3.5 Box-Behnken实验设计和响应面法分析第50-52页
    3.6 CSL酶活的响应面分析第52-54页
    3.7 验证实验及结果分析第54页
    3.8 微波加热处理下脂肪酶CSL的可重复性第54-55页
    3.9 本章小结第55-58页
第4章 熊果苷及其酶促衍生物的体外抗氧化作用研究第58-72页
    4.1 仪器与材料第58-60页
        4.1.1 主要实验仪器第58-59页
        4.1.2 实验试剂第59页
        4.1.3 主要溶液的配制第59-60页
    4.2 实验方法第60-62页
        4.2.1 总抗氧化能力的测定方法第60页
        4.2.2 分光光度法测定清除DPPH自由基第60页
        4.2.3 分光光度法测定清除ABTS自由基第60-61页
        4.2.4 铁离子还原能力的测定(FRAP)第61页
        4.2.5 超氧自由基(·O_2~-)的清除能力测定法(邻苯三酚自氧化法)第61页
        4.2.6 油水分配系数溶剂预饱和第61-62页
        4.2.7 正辛醇/水分配系数的测定方法第62页
        4.2.8 统计学分析第62页
    4.3 结果与讨论第62-68页
        4.3.1 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的总抗氧化能力第62-64页
        4.3.2 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的DPPH自由基抗氧化性第64-65页
        4.3.3 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的ABTS·+抗氧化性第65-66页
        4.3.4 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的铁离子还原能力第66-67页
        4.3.5 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除能力第67-68页
        4.3.6 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷的亲脂性第68页
    4.4 本章小结第68-72页
第5章 熊果苷及其酶促衍生物的体内抗氧化作用研究第72-90页
    5.1 仪器与材料第72-74页
        5.1.1 主要实验仪器第72-73页
        5.1.2 实验试剂第73页
        5.1.3 主要溶液和培养基的配制第73-74页
    5.2 实验方法第74-78页
        5.2.1 线虫的一般培养第74-75页
        5.2.2 线虫生理表型的观测第75页
        5.2.3 线虫应激抵抗力的观测第75-77页
        5.2.4 线虫寿命相关基因的表达分析第77-78页
        5.2.5 数据处理工具及统计学方法第78页
    5.3 实验结果第78-87页
        5.3.1 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫寿命的影响第78-79页
        5.3.2 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫产卵的影响第79-81页
        5.3.3 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫运动的影响第81-82页
        5.3.4 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫热应激抵抗能力的影响第82-83页
        5.3.5 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫抗化学氧化的影响第83-85页
        5.3.6 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫抗紫外辐射的影响第85-86页
        5.3.7 对紫外辐射条件下线虫体内ROS的检测第86页
        5.3.8 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对线虫衰老相关基因的影响第86-87页
    5.4 本章小结第87-90页
第6章 熊果苷及其酶促衍生物抗肿瘤及作用机理的研究第90-114页
    6.1 仪器与材料第91-93页
        6.1.1 主要实验仪器第91页
        6.1.2 材料与试剂第91-92页
        6.1.3 实验中涉及的细胞株和实验动物第92页
        6.1.4 主要溶液的配制第92-93页
    6.2 实验方法第93-99页
        6.2.1 细胞复苏第93页
        6.2.2 细胞培养第93-94页
        6.2.3 细胞冻存第94页
        6.2.4 MTT抗癌活性测定第94-95页
        6.2.5 NaOH裂解法测定黑素含量第95页
        6.2.6 L-DOPA法测定酪氨酸酶活性第95-96页
        6.2.7 细胞周期的测定方法第96页
        6.2.8 细胞凋亡的测定方法第96页
        6.2.9 线粒体膜电位实验第96-97页
        6.2.10 western blotting检测细胞凋亡信号通路第97-98页
        6.2.11 细胞划痕实验的测定方法第98页
        6.2.12 细胞迁移实验的测定方法第98-99页
        6.2.13 黑色素瘤小鼠模型的建立和分组处理方法第99页
        6.2.14 统计学处理第99页
    6.3 实验结果第99-111页
        6.3.1 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞形态的影响第99-101页
        6.3.2 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞增殖的影响第101-103页
        6.3.3 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞的酪氨酸酶活性抑制率的影响第103-104页
        6.3.4 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞的黑素含量影响第104-105页
        6.3.5 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞周期的影响第105-106页
        6.3.6 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞凋亡的影响第106-107页
        6.3.7 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞线粒体膜电位的影响第107-108页
        6.3.8 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞凋亡蛋白Caspase的影响第108-109页
        6.3.9 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对小鼠B16细胞迁移的影响第109-110页
        6.3.10 熊果苷及其 6′-乙酰化熊果苷对BALB/c裸鼠体内黑色素瘤增殖的影响第110-111页
    6.4 本章小结第111-114页
第7章 结论与展望第114-118页
参考文献第118-134页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第134-136页
致谢第136页

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