| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写表 | 第9-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）研究综述 | 第14-19页 |
| 1.1.1 疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）概述 | 第14-16页 |
| 1.1.2 疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)遗传转化体系的建立 | 第16-19页 |
| 1.2 腺苷酸环化酶结合蛋白研究概述 | 第19-21页 |
| 1.2.1 腺苷酸环化酶结合蛋白（CAP）的发现及其蛋白结构 | 第19-20页 |
| 1.2.2 腺苷酸环化酶结合蛋白（CAP）的功能概述 | 第20-21页 |
| 1.3 本论文的研究内容及意义 | 第21-23页 |
| 第2章 疏绵状嗜热丝孢菌CAP基因的鉴定、克隆及敲除 | 第23-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 敲除载体与引物设计 | 第25页 |
| 2.1.5 试验所用培养基 | 第25-28页 |
| 2.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第28-29页 |
| 2.2 研究方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 疏绵状嗜热丝孢菌CAP生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.2 疏绵状嗜热丝孢菌全基因组DNA的提取 | 第29-31页 |
| 2.2.3 疏绵状嗜热丝孢菌总RNA的提取与反转录生成 1st-Strand c DNA | 第31-32页 |
| 2.2.4 细菌质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.5 质粒的酶切与连接 | 第33-34页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5α热激感受态的制备与遗传转化 | 第34-36页 |
| 2.2.7 根瘤土壤农杆菌AgL-1 热激感受态的制备与转化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 CAP敲除载体的构建 | 第37页 |
| 2.2.9 疏绵状嗜热丝孢菌的遗传转化法 | 第37-39页 |
| 2.2.10 疏绵状嗜热丝孢菌突变体的筛选及验证 | 第39页 |
| 2.2.11 菌株营养生长与菌落形态观察 | 第39页 |
| 2.2.12 菌株产孢量统计 | 第39-40页 |
| 2.2.13 菌株孢子萌发形态观察 | 第40页 |
| 2.2.14 CAP参与疏绵状嗜热丝孢菌H2O2的逆境应答 | 第40页 |
| 2.2.15 CAP参与疏绵状嗜热丝孢菌细胞壁完整性和渗透逆境应答 | 第40-41页 |
| 2.3 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.3.1 疏绵状嗜热丝孢菌CAP基因的获得及序列比对 | 第41页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌CAP1基因及疏绵状嗜热丝孢菌CAP基因的氨基酸序列保守结构域的预测与分析 | 第41-42页 |
| 2.3.3 疏绵状嗜热丝孢菌CAP基因的氨基酸序列同源性和进化分析 | 第42-43页 |
| 2.3.4 疏绵状嗜热丝孢菌CAP敲除载体的构建与验证 | 第43-44页 |
| 2.3.5 CAP敲除突变体的检测及获得 | 第44-45页 |
| 2.3.6 CAP基因的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌营养生长 | 第45-46页 |
| 2.3.7 CAP基因的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的分生孢子形态建成 | 第46-47页 |
| 2.3.8 CAP基因参与疏绵状嗜热丝孢菌的逆境应答 | 第47-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-50页 |
| 第3章 疏绵状嗜热丝孢菌CAP基因的互补及CAP蛋白的亚细胞定位 | 第50-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第50页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第50页 |
| 3.1.4 载体与引物 | 第50-51页 |
| 3.1.5 试验所用培养基 | 第51-52页 |
| 3.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第52页 |
| 3.2 研究方法 | 第52-59页 |
| 3.2.1 稻瘟病菌/十字花科炭疽病菌中CAP互补序列生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 3.2.2 稻瘟病菌/十字花科炭疽病菌/疏绵状嗜热丝孢菌全基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 3.2.3 稻瘟病菌/十字花科炭疽病菌/疏绵状嗜热丝孢菌总RNA的提取与反转录生成 1st-Strand cDNA | 第53页 |
| 3.2.4 细菌质粒DNA的提取 | 第53页 |
| 3.2.5 质粒的酶切与连接 | 第53-54页 |
| 3.2.6 大肠杆菌DH5α热激感受态的制备与遗传转化 | 第54页 |
| 3.2.7 土壤根瘤农杆菌AgL-1 热激感受态的制备与遗传转化 | 第54页 |
| 3.2.8 CAP互补载体/亚细胞定位载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.9 疏绵状嗜热丝孢菌CAP蛋白的亚细胞定位预测与分析 | 第55-56页 |
| 3.2.10 疏绵状嗜热丝孢菌CAP蛋白亚细胞定位分析方法 | 第56页 |
| 3.2.11 疏绵状嗜热丝孢菌的遗传转化 | 第56-58页 |
| 3.2.12 疏绵状嗜热丝孢菌CAP互补/定位突变体的筛选与确认 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-62页 |
| 3.3.1 稻瘟病菌/十字花科炭疽病菌/疏绵状嗜热丝孢菌中CAP基因互补/亚细胞定位序列比对 | 第59-60页 |
| 3.3.2 稻瘟病菌/十字花科炭疽病菌/疏绵状嗜热丝孢菌中CAP的氨基酸序列保守结构域的预测与分析 | 第60-61页 |
| 3.3.3 CAP基因互补/亚细胞定位载体的构建与验证 | 第61-62页 |
| 3.3.4 CAP互补/亚细胞定位突变体菌株的检测及获得 | 第62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 第4章 CAP基因在疏绵状嗜热丝孢菌生长发育及逆境自我保护中的功能分析 | 第63-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第63页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第63页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第63页 |
| 4.1.5 试验所用培养基 | 第63-64页 |
| 4.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第64页 |
| 4.2 研究方法 | 第64-68页 |
| 4.2.1 菌株营养生长与不同温度下菌落形态观察 | 第64页 |
| 4.2.2 振荡培养条件下菌株孢子形态观察及菌丝干重的测定 | 第64-65页 |
| 4.2.3 菌株产孢量统计 | 第65页 |
| 4.2.4 菌株孢子萌发数的测定 | 第65页 |
| 4.2.5 菌株H_2O_2敏感性测定及H_2O_2含量测定 | 第65-67页 |
| 4.2.6 菌株疏水性测定 | 第67页 |
| 4.2.7 菌株细胞壁完整性的研究 | 第67-68页 |
| 4.2.8 菌株渗透胁迫敏感性的研究 | 第68页 |
| 4.2.9 外源加入cAMP对菌株生长发育的影响 | 第68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-79页 |
| 4.3.1 CAP的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的营养生长 | 第68-70页 |
| 4.3.2 CAP基因并非疏绵状嗜热丝孢菌维持其嗜热生长所必需的 | 第70-71页 |
| 4.3.3 CAP的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的生殖生长 | 第71-72页 |
| 4.3.4 CAP不影响疏绵状嗜热丝孢菌的孢子萌发活力 | 第72-73页 |
| 4.3.5 CAP缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的H2O2敏感性 | 第73-74页 |
| 4.3.6 CAP的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌细胞壁完整性 | 第74-75页 |
| 4.3.7 CAP缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的细胞渗透压 | 第75-77页 |
| 4.3.8 外源加入cAMP能有效弥补CAP缺失对疏绵状嗜热丝孢菌生长发育造成的不良影响 | 第77-79页 |
| 4.4 小结 | 第79-81页 |
| 第5章 研究结果与讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 作者简介 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
