| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第12-17页 |
| ·脂肪酶介绍 | 第12页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第12-14页 |
| ·脂肪酶的结构与功能关系 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第16-17页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第17-21页 |
| ·微生物脂肪酶的来源 | 第17-18页 |
| ·微生物脂肪酶的产生 | 第18页 |
| ·微生物脂肪酶活性的检测和测定 | 第18-19页 |
| ·微生物脂肪酶的纯化 | 第19页 |
| ·微生物脂肪酶基因工程重组表达技术 | 第19-21页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶 | 第21-24页 |
| ·白假丝酵母及其脂肪酶 | 第21页 |
| ·脂肪酶在白假丝酵母生长中的作用 | 第21-22页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因 | 第22页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶的表达 | 第22-23页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶的重组表达 | 第23-24页 |
| ·响应面法 | 第24-27页 |
| ·响应面法介绍 | 第24-25页 |
| ·响应面法在培养基和发酵过程的优化研究中的应用 | 第25-27页 |
| ·本课题的研究意义、设计思路及主要创新点 | 第27-29页 |
| ·本课题的研究意义 | 第27-28页 |
| ·本课题的设计思路 | 第28-29页 |
| 第二章 白假丝酵母脂肪酶基因克隆 | 第29-49页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·材料与设备 | 第29-32页 |
| ·菌株、质粒 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·主要溶液及培养基配置 | 第30-31页 |
| ·主要设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-42页 |
| ·培养与保存白假丝酵母 | 第32页 |
| ·白假丝酵母基因组的提取 | 第32页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的克隆及全长基因序列测定 | 第32-36页 |
| ·定点突变白假丝酵母脂肪酶基因lip5 | 第36-38页 |
| ·毕赤酵母表达载体构建 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母重组表达菌株的构建及筛选 | 第39-41页 |
| ·CaLIP5 在毕赤酵母中的表达 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-47页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的克隆及序列测定和分析 | 第42-43页 |
| ·白假丝酵母脂肪酶基因lip5 的定点突变 | 第43-44页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母重组表达菌株的构建与筛选 | 第45-46页 |
| ·CaLIP5 在毕赤酵母中的表达 | 第46-47页 |
| 本章小结 | 第47-49页 |
| 第三章 CaLIP5 蛋白序列分析和结构预测 | 第49-61页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与设备 | 第49-50页 |
| ·生物信息学工具 | 第49页 |
| ·网络资源 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-51页 |
| ·一级结构分析 | 第50页 |
| ·疏水性、极性分析和跨膜结构域预测 | 第50-51页 |
| ·蛋白质Motif 及结构域家族搜索 | 第51页 |
| ·二级结构预测 | 第51页 |
| ·同源建模预测三级结构 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-60页 |
| ·CaLIP5 一级结构分析 | 第51-52页 |
| ·疏水性、极性和跨膜结构域 | 第52-53页 |
| ·CaLIP5 Motif 分析和结构域家族搜索 | 第53-54页 |
| ·CaLIP5 二级结构分析 | 第54-57页 |
| ·CaLIP5 同源建模 | 第57-60页 |
| 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 培养基成分和培养条件对毕赤酵母重组表达CaLIP5 的影响 | 第61-69页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与设备 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·重组毕赤酵母的培养及生长曲线测定 | 第61页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第61页 |
| ·中心组合设计 | 第61-62页 |
| ·统计分析 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-68页 |
| ·重组毕赤酵母细胞生长及酶活变化 | 第63页 |
| ·回归方程分析 | 第63-64页 |
| ·各因素对重组CaLIP5 表达的影响 | 第64-68页 |
| ·最优条件的确定及验证 | 第68页 |
| 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 CaLIP5 的纯化及性质研究 | 第69-80页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料与设备 | 第69-71页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·主要溶液配制 | 第69-70页 |
| ·主要设备 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·重组CaLIP5 的纯化 | 第71页 |
| ·CaLIP5 的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色 | 第71-72页 |
| ·重组CaLIP5 的底物特异性 | 第72页 |
| ·温度对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响 | 第72页 |
| ·pH 对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响 | 第72页 |
| ·各种化学物质、表面活性剂和有机溶剂对重组CaLIP5 的影响 | 第72-73页 |
| ·重组CaLIP5 的动力学常数及活化能测定 | 第73页 |
| ·结果及讨论 | 第73-79页 |
| ·重组CaLIP5 的纯化 | 第73页 |
| ·CaLIP5 的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色 | 第73-74页 |
| ·重组CaLIP5 的底物特异性 | 第74-75页 |
| ·温度对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响 | 第75-76页 |
| ·pH 对重组CaLIP5 的酶活及稳定性的影响 | 第76页 |
| ·各种化学物质、表面活性剂和有机溶剂对重组CaLIP5 的影响 | 第76-78页 |
| ·重组CaLIP5 的催化常数 | 第78-79页 |
| 本章小结 | 第79-80页 |
| 结论与展望 | 第80-82页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 本课题的创新点 | 第81页 |
| 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-95页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97页 |
