| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 DNA甲基化水平对脂肪间充质干细胞特性的调控 | 第18-32页 |
| 1 DNA甲基化 | 第18-23页 |
| 1.1 DNA甲基转移酶 | 第18-22页 |
| 1.1.1 DNMT1 | 第19-20页 |
| 1.1.2 DNMT2 | 第20-21页 |
| 1.1.3 DNMT3A和DNMT3B | 第21-22页 |
| 1.1.4 DNMT3L | 第22页 |
| 1.2 CpG岛(CpG island) | 第22-23页 |
| 1.3 DNA甲基化过程 | 第23页 |
| 2 DNA去甲基化(DNA DEMETHYLATION) | 第23-26页 |
| 2.1 主动去甲基化 | 第24-25页 |
| 2.1.1 MBD2 | 第24页 |
| 2.1.2 BER (Base excision repair)介导去甲基化途径 | 第24页 |
| 2.1.3 NER (Nucleotide excision repair)介导去甲基化途径 | 第24页 |
| 2.1.4 氧化去甲基化(Oxidative demethylation) | 第24-25页 |
| 2.1.5 SAM机制 | 第25页 |
| 2.2 被动去甲基化 | 第25-26页 |
| 2.3 DNA甲基化抑制剂 | 第26页 |
| 3 脂肪间充质干细胞( ADIPOSE-DERIVED STEM CELLS)特性 | 第26-29页 |
| 3.1 脂肪间充质干细胞生物学特性 | 第26-27页 |
| 3.2 脂肪间充质干细胞多向分化潜能 | 第27-28页 |
| 3.2.1 成骨分化(Osteogenic differentiation) | 第27页 |
| 3.2.2 成脂分化(Adipogenic differentiation) | 第27页 |
| 3.2.3 成软骨分化(Chondrogenic differentiation) | 第27页 |
| 3.2.4 成肌分化(Myogenic differentiaton) | 第27-28页 |
| 3.2.5 成神经分化(Neural differentiation) | 第28页 |
| 3.2.6 成内皮分化(Endothelial differentiation) | 第28页 |
| 3.2.7 成肝分化(Hepatic differentiation) | 第28页 |
| 3.2.8 成造血细胞分化(Hematopoietic differentiation) | 第28页 |
| 3.3 脂肪间充质干细胞增殖特性 | 第28-29页 |
| 3.4 脂肪间充质干细胞凋亡特性 | 第29页 |
| 4 DNA甲基化水平调控脂肪间充质干细胞特性 | 第29-32页 |
| 4.1 调控生物学特性 | 第29-30页 |
| 4.2 调控分化潜能 | 第30-31页 |
| 4.2.1 调控成骨分化 | 第30页 |
| 4.2.2 调控成脂分化 | 第30页 |
| 4.2.3 调控成肌分化 | 第30页 |
| 4.2.4 调控内皮分化 | 第30-31页 |
| 4.2.5 调控成肝分化 | 第31页 |
| 4.3 调控增殖特性 | 第31页 |
| 4.4 调控凋亡特性 | 第31-32页 |
| 第二章 表观遗传试剂对阿尔巴斯绒山羊脂肪间充质干细胞生长的影响 | 第32-42页 |
| 引言 | 第32-33页 |
| 1 实验材料 | 第33页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第33页 |
| 1.2 实验细胞 | 第33页 |
| 1.3 实验试剂及耗材 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-36页 |
| 2.1 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2 优化处理浓度 | 第34页 |
| 2.2.1 观察细胞生长 | 第34页 |
| 2.2.2 筛选处理浓度 | 第34页 |
| 2.3 MTT检测处理后细胞的增殖情况 | 第34-35页 |
| 2.4 流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 2.4.1 检测细胞周期 | 第35页 |
| 2.4.2 检测细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-41页 |
| 3.1 gADSCs生长曲线和处理浓度确定 | 第36页 |
| 3.2 细胞活性 | 第36-37页 |
| 3.3 细胞周期 | 第37-39页 |
| 3.4 细胞凋亡 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 表观遗传试剂对阿尔巴斯绒山羊脂肪间充质干细胞去甲基化作用的检测 | 第42-58页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第43页 |
| 1.2 实验试剂及耗材 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-52页 |
| 2.1 提取基因组 | 第43-44页 |
| 2.2 全基因组甲基化水平定量检测 | 第44-45页 |
| 2.3 全基因组羟甲基化水平定量检测 | 第45-46页 |
| 2.4 DNMTs和TETs的转录和表达检测 | 第46-52页 |
| 2.4.1 细胞免疫荧光检测DNMTs和TETs的表达情况 | 第47页 |
| 2.4.2 实时定量PCR检测DNMTs和TETs的转录 | 第47-51页 |
| 2.4.3 蛋白质免疫印迹检测DNMTs和TETs的表达 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-56页 |
| 3.1 全基因组甲基化水平变化 | 第52页 |
| 3.2 全基因组羟甲基化水平变化 | 第52-53页 |
| 3.3 DNMTs和TETs的转录和表达的变化 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 DNA去甲基化对细胞增殖、凋亡和多能性相关基因表达的影响 | 第58-67页 |
| 引言 | 第58-59页 |
| 1 实验材料 | 第59页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第59页 |
| 1.2 实验试剂及耗材 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 细胞免疫荧光检测增殖、凋亡和多能性相关基因的表达情况 | 第59页 |
| 2.2 增殖、凋亡和多能性相关基因在mRNA水平的表达 | 第59页 |
| 2.3 增殖、凋亡和多能性相关基因在蛋白水平的表达 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-65页 |
| 3.1 DNA去甲基化对多能性相关基因表达的影响 | 第60-62页 |
| 3.2 DNA去甲基化对增殖相关基因表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.3 DNA去甲基化对凋亡相关基因表达的影响 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 DNA去甲基化对GADSCS向三胚层分化的影响 | 第67-90页 |
| 引言 | 第67-68页 |
| 1 实验材料 | 第68-69页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第68页 |
| 1.2 实验试剂及耗材 | 第68页 |
| 1.3 诱导培养液 | 第68-69页 |
| 1.3.1 脂肪细胞分化 | 第68-69页 |
| 1.3.2 神经细胞分化 | 第69页 |
| 1.3.3 肝脏细胞分化 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-75页 |
| 2.1 DNA去甲基化对脂肪细胞分化的影响 | 第69-71页 |
| 2.1.1 诱导脂肪细胞分化 | 第69页 |
| 2.1.2 油红O染色鉴定脂肪细胞 | 第69-70页 |
| 2.1.3 脂滴定量检测脂肪细胞分化程度 | 第70页 |
| 2.1.4 实时定量PCR检测脂肪细胞相关基因的表达 | 第70-71页 |
| 2.2 DNA去甲基化对神经细胞分化的影响 | 第71-73页 |
| 2.2.1 诱导神经细胞分化 | 第71页 |
| 2.2.2 细胞免疫荧光染色鉴定神经细胞 | 第71页 |
| 2.2.3 ELISA检测神经细胞分泌NGF | 第71-72页 |
| 2.2.4 实时定量PCR检测神经细胞相关基因的表达 | 第72-73页 |
| 2.3 DNA去甲基化对肝脏细胞分化的影响 | 第73-75页 |
| 2.3.1 诱导肝脏细胞分化 | 第73页 |
| 2.3.2 糖原PAS染色和细胞免疫荧光染色鉴定肝脏细胞 | 第73-74页 |
| 2.3.3 尿素浓度测定和ELISA检测肝脏细胞分泌白蛋白 | 第74页 |
| 2.3.4 实时定量PCR检测肝脏细胞相关基因的表达 | 第74-75页 |
| 3 实验结果 | 第75-87页 |
| 3.1 脂肪细胞分化鉴定 | 第75-77页 |
| 3.2 脂滴产量和脂肪细胞相关基因表达差异 | 第77-78页 |
| 3.2.1 测定脂滴含量 | 第77页 |
| 3.2.2 脂肪细胞相关基因表达 | 第77-78页 |
| 3.3 神经细胞分化鉴定 | 第78-81页 |
| 3.4 NGF分泌和神经细胞相关基因表达差异 | 第81-82页 |
| 3.4.1 ELISA检测NGF分泌 | 第81-82页 |
| 3.4.2 神经细胞相关基因表达 | 第82页 |
| 3.5 肝脏细胞分化鉴定 | 第82-85页 |
| 3.6 ALB和尿素分泌及肝脏细胞相关基因表达 | 第85-87页 |
| 3.6.1 ELISA检测ALB分泌和尿素含量测定 | 第85-86页 |
| 3.6.2 肝脏细胞相关基因表达 | 第86-87页 |
| 4 讨论 | 第87-90页 |
| 第六章 DNA去甲基化对PPARG、RBFOX3和HNF4A启动子甲基化水平的影响 | 第90-112页 |
| 引言 | 第90-91页 |
| 1 实验材料 | 第91页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第91页 |
| 1.2 实验试剂及耗材 | 第91页 |
| 2 实验方法 | 第91-97页 |
| 2.1 分化前转录调控因子的定量检测 | 第91页 |
| 2.2 提取基因组 | 第91页 |
| 2.3 CpG岛和TSS位点预测 | 第91-92页 |
| 2.4 基因组硫化处理 | 第92-93页 |
| 2.5 BSP扩增 | 第93-96页 |
| 2.6 BSP产物纯化 | 第96-97页 |
| 2.7 目的片段克隆测序 | 第97页 |
| 3 实验结果 | 第97-111页 |
| 3.1 分化前转录调控因子的表达 | 第97页 |
| 3.2 生物信息学分析CpG岛和TSS位点 | 第97-100页 |
| 3.3 启动子区域甲基化分析 | 第100-111页 |
| 4 讨论 | 第111-112页 |
| 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第128-129页 |
