| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1 副溶血性弧菌概述 | 第11页 |
| 2 副溶血性弧菌毒力因子研究 | 第11-15页 |
| 2.1 溶血毒素 | 第12-13页 |
| 2.1.1 TDH | 第12页 |
| 2.1.2 TRH | 第12-13页 |
| 2.1.3 TLH | 第13页 |
| 2.2 黏附因子 | 第13页 |
| 2.3 侵袭相关因子 | 第13-14页 |
| 2.4 尿素酶 | 第14页 |
| 2.5 Ⅲ型分泌系统(TTSS) | 第14-15页 |
| 2.6 摄铁系统 | 第15页 |
| 3 副溶血性弧菌的耐药现状 | 第15-16页 |
| 4 喹诺酮类抗菌药耐药性机制 | 第16-19页 |
| 4.1 靶位基因突变 | 第16-17页 |
| 4.2 质粒介导耐药(PMQR) | 第17-18页 |
| 4.3 细胞膜通透性改变 | 第18页 |
| 4.4 主动药物外排作用 | 第18-19页 |
| 5 药物敏感试验方法 | 第19-20页 |
| 6 论文研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 副溶血性弧菌毒力基因筛查及编码推测外膜蛋白多样性分析 | 第21-36页 |
| 1 材料与方法 | 第21-29页 |
| 1.1 菌株及来源 | 第21-24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第25页 |
| 1.4 试剂与培养基 | 第25页 |
| 1.5 方法 | 第25-29页 |
| 1.5.1 菌种的复苏与培养 | 第25-26页 |
| 1.5.2 菌种鉴定 | 第26-27页 |
| 1.5.3 细菌DNA的制备 | 第27页 |
| 1.5.4 PCR检测 | 第27-29页 |
| 1.5.5 VPA0166基因扩增产物测序 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.1 分离株的菌落形态 | 第29页 |
| 2.2 菌株鉴定结果 | 第29-30页 |
| 2.3 tlh、tdh、trh和orf8基因的PCR检测结果 | 第30-31页 |
| 2.4 VPA0166基因检测 | 第31-33页 |
| 2.5 VPA0166基因测序结果分析 | 第33页 |
| 2.6 VPA0166基因多样性与毒力基因携带关联性分析 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 副溶血性弧菌药敏性试验及耐药基因检测 | 第36-56页 |
| 1 材料与方法 | 第36-43页 |
| 1.1 菌株 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第37页 |
| 1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第37页 |
| 1.5 药敏纸片 | 第37-38页 |
| 1.6 方法 | 第38-43页 |
| 1.6.1 药敏试验 | 第38-39页 |
| 1.6.2 细菌DNA模板制备 | 第39页 |
| 1.6.3 引物设计与合成 | 第39-41页 |
| 1.6.4 PCR扩增 | 第41-42页 |
| 1.6.5 PCR产物测序 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-54页 |
| 2.1 药敏纸片抑菌圈形态 | 第43页 |
| 2.2 药敏试验结果 | 第43-44页 |
| 2.3 不同年份和来源菌株对环丙沙星耐药性比较 | 第44-45页 |
| 2.4 VPA0166 a型和b型类群对环丙沙星耐药性分析 | 第45-46页 |
| 2.5 耐药基因检测结果 | 第46-49页 |
| 2.5.1 QRDR、外排泵基因检测情况 | 第46-47页 |
| 2.5.2 PMQR基因分布情况 | 第47-49页 |
| 2.6 部分阳性菌株测序结果分析 | 第49-54页 |
| 2.6.1 gyrA、 parC、 gyrB、 parE、 norM基因序列分析 | 第49-53页 |
| 2.6.2 PMQR阳性基因序列分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 耐药株构建及其基因突变的研究 | 第56-67页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1 菌株 | 第56-57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第57页 |
| 1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| 2.1 最低抑菌浓度(MIC)测定 | 第58-59页 |
| 2.2 体外耐药性诱导 | 第59页 |
| 2.3 诱导性耐药菌株稳定性实验 | 第59页 |
| 2.4 模板DNA提取 | 第59-60页 |
| 2.5 PCR检测 | 第60页 |
| 2.5.1 菌株鉴定 | 第60页 |
| 2.5.2 耐药相关基因检测 | 第60页 |
| 2.6 PCR产物纯化与序列测定 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-65页 |
| 3.1 最低抑菌浓度及耐药性诱导试验结果 | 第60-61页 |
| 3.2 诱导性耐药菌株药敏试验结果 | 第61-62页 |
| 3.3 诱导前后VPA0166基因检测 | 第62-64页 |
| 3.4 诱导性耐药菌株相关基因检测 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
