鸡白痢沙门氏菌常规和实时荧光定量PCR检测方法的建立
| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 背景 | 第11页 |
| 1.2 鸡白痢沙门氏菌概述 | 第11-14页 |
| 1.2.1 病原学 | 第11-12页 |
| 1.2.2 临床症状及病理变化 | 第12-13页 |
| 1.2.3 流行病学 | 第13-14页 |
| 1.3 鸡白痢的诊断检测 | 第14-17页 |
| 1.3.1 常规细菌分离鉴定方法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 全血平板凝集检测 | 第15页 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附实验 | 第15页 |
| 1.3.4 分子生物学检测技术 | 第15-17页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物及材料 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 检测靶点的筛选与引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.2 样品的前处理 | 第21-22页 |
| 2.2.3 PCR反应条件的优化 | 第22页 |
| 2.2.4 检测方法特异性评价 | 第22-23页 |
| 2.2.5 检测方法灵敏度评价 | 第23页 |
| 2.2.6 人工污染样品检测 | 第23-24页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR标准品的制备 | 第24-26页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR标准曲线的制备 | 第26页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR特异性评价 | 第26-27页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR灵敏度评价 | 第27页 |
| 2.2.11 荧光定量PCR方法检测效果评价 | 第27-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-43页 |
| 3.1 最适增菌液及模板制备方法的选择 | 第29-30页 |
| 3.2 常规PCR反应条件优化结果 | 第30-32页 |
| 3.2.1 退火温度的优化 | 第30页 |
| 3.2.2 引物浓度的优化 | 第30-31页 |
| 3.2.3 程序循环数的优化 | 第31页 |
| 3.2.4 反应条件优化结果 | 第31-32页 |
| 3.3 常规PCR反应的特异性评价结果 | 第32-33页 |
| 3.4 常规PCR方法的灵敏度评价结果 | 第33-34页 |
| 3.4.1 鸡白痢沙门氏菌基因组检测灵敏度评价 | 第33-34页 |
| 3.4.2 鸡白痢沙门氏菌纯培养物检测灵敏度评价 | 第34页 |
| 3.5 常规PCR方法对人工模拟样品检测 | 第34-36页 |
| 3.5.1 人工污染鸡粪便样品的检测 | 第34-35页 |
| 3.5.2 人工污染鸡蛋样品的检测 | 第35-36页 |
| 3.5.3 人工污染鸡肉样品的检测 | 第36页 |
| 3.6 荧光定量PCR标准品制备结果 | 第36-38页 |
| 3.6.1 目的基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.6.2 标准品质粒的鉴定测序 | 第37-38页 |
| 3.7 荧光定量PCR标准曲线 | 第38-39页 |
| 3.8 荧光定量PCR方法特异性评价 | 第39-40页 |
| 3.9 荧光定量PCR方法灵敏度评价 | 第40页 |
| 3.10 荧光定量PCR方法检测模拟样品效果 | 第40-43页 |
| 3.10.1 人工污染鸡粪便样品的检测效果评价 | 第40-41页 |
| 3.10.2 人工污染鸡蛋样品的检测效果评价 | 第41页 |
| 3.10.3 人工污染鸡肉样品的检测效果评价 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 鸡白痢沙门氏菌检测靶点的选择 | 第43页 |
| 4.2 关于增菌液的选择 | 第43页 |
| 4.3 模板制备方法的选择 | 第43-44页 |
| 4.4 常规PCR方法检测效果评价 | 第44页 |
| 4.5 实时荧光定量PCR方法的评价 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
