| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 中英文缩写表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 实验材料 | 第17-26页 |
| 1.1 细胞系 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.2.1 细胞培养、Wenstern Bloting、Real-time PCR试剂 | 第17-18页 |
| 1.2.2 Real-time PCR引物序列 | 第18页 |
| 1.2.3 HIF-1αsiRNA转染序列 | 第18页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 1.4 实验耗材 | 第19-20页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第20-26页 |
| 1.5.1 细胞培养所用试剂的配制 | 第20页 |
| 1.5.2 氯化钴母液 | 第20-21页 |
| 1.5.3 免疫组织化学的试剂配制 | 第21-22页 |
| 1.5.4 Western Bloting用试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.5.5 变性琼脂糖凝胶电泳用试剂 | 第24-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.1 免疫组织化学 | 第26-27页 |
| 2.2 细胞培养技术 | 第27-29页 |
| 2.2.1 EC-1 细胞的复苏 | 第27-28页 |
| 2.2.2 EC-1 细胞的传代 | 第28页 |
| 2.2.3 EC-1 细胞的冻存 | 第28页 |
| 2.2.4 CoCl2建立化学性细胞缺氧模型 | 第28-29页 |
| 2.3 RT-PCR实验步骤 | 第29-31页 |
| 2.3.1 细胞内总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.3.2 RNA完整性的检测 | 第29-30页 |
| 2.3.3 总RNA浓度和纯度的检测 | 第30页 |
| 2.3.4 逆转录操作 | 第30页 |
| 2.3.5 Real-time PCR反应 | 第30-31页 |
| 2.4 Western blot实验 | 第31-33页 |
| 2.4.1 细胞内总蛋白的提取 | 第31页 |
| 2.4.2 提取蛋白浓度的测定 | 第31-32页 |
| 2.4.3 Western blot具体操作步骤 | 第32-33页 |
| 2.5 Lipofectamine?2000 和HIF-1α siRNA共转染 | 第33-34页 |
| 2.6 酶联免疫吸附法（Elisa） | 第34-35页 |
| 2.6.1 实验前准备 | 第34-35页 |
| 2.6.2 洗板 | 第35页 |
| 2.6.3 操作 | 第35页 |
| 2.7 细胞侵袭实验 | 第35-36页 |
| 2.7.1 细胞准备 | 第35-36页 |
| 2.7.2 实验组细胞处理 | 第36页 |
| 2.7.3 Transwell小室染色、计数 | 第36页 |
| 2.8 统计分析 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-49页 |
| 3.1 HIF-1α与MMP-9 蛋白在食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的表达 | 第38-39页 |
| 3.2 在食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α和MMP-9 蛋白表达与临床病理因素的关系 | 第39-42页 |
| 3.3 在食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α与MMP-9 蛋白的表达的相关性 | 第42页 |
| 3.4 缺氧对HIF-1α和MMP-9 mRNA表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 缺氧对HIF-1α与MMP-9 蛋白表达的影响 | 第43页 |
| 3.6 ELisa检测缺氧对细胞上清液中MMP-9 蛋白分泌量的影响 | 第43-44页 |
| 3.7 HIF-1α siRNA转染后对EC-1 细胞HIF-1α与MMP-9 mRNA表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.8 HIF-1α siRNA转染后对EC-1 细胞HIF-1α与MMP-9 蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.9 HIF-1α siRNA转染后对EC-1 细胞上清液中MMP-9 蛋白分泌量的影响 | 第46-47页 |
| 3.10 HIF-1α siRNA转染后对食管鳞癌细胞EC-1 的侵袭能力的影响 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 综述 HIF-1α参与肿瘤转移的机制 | 第55-72页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 个人简历 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
