| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 大肠杆菌的致病机理 | 第12-13页 |
| 1.2 抗细菌感染药物的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 SAHN酶蛋白参与甲基循环 | 第14-15页 |
| 1.4 细菌的群感效应 | 第15-16页 |
| 1.5 自诱导剂-2（AI-2） | 第16-18页 |
| 1.5.1 AI-2 的生物合成途径 | 第16-17页 |
| 1.5.2 AI-2 的生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.6 展望 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料、仪器与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.3.1 重组E.coli S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(SAHN)的克隆 | 第23-30页 |
| 2.3.1.1 目的基因的选择 | 第23页 |
| 2.3.1.2 PCR引物的设计 | 第23页 |
| 2.3.1.3 大肠杆菌总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.1.4 PCR扩增sahn基因 | 第24页 |
| 2.3.1.5 PCR扩增产物的纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.1.6 建立连接反应体系 | 第25页 |
| 2.3.1.7 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.3.1.8 重组克隆载体转化 | 第25-26页 |
| 2.3.1.9 鉴定阳性克隆载体 | 第26页 |
| 2.3.1.10 提取构建及保藏质粒 | 第26-27页 |
| 2.3.1.11 对pMD18-T-SAHN、pET-28a质粒进行双酶切 | 第27页 |
| 2.3.1.12 胶回收酶切片段 | 第27-28页 |
| 2.3.1.13 构建表达载体 | 第28页 |
| 2.3.1.14 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.3.1.15 表达载体转化 | 第28-29页 |
| 2.3.1.16 阳性重组子的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 SAHN蛋白的表达 | 第30-31页 |
| 2.3.2.1 IPTG诱导表达 | 第30页 |
| 2.3.2.2 大肠杆菌细胞破碎 | 第30-31页 |
| 2.3.3 SAHN蛋白的纯化 | 第31-34页 |
| 2.3.3.1 SAHN蛋白的亲和层析 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 SAHN蛋白浓缩除盐 | 第32页 |
| 2.3.3.3 纯化浓缩的结果验证 | 第32-34页 |
| 2.3.4 测定SAHN蛋白浓度 | 第34页 |
| 2.3.5 SAHN酶活测定及酶促反应最适条件分析 | 第34-37页 |
| 2.3.5.1 酶偶联分析检测技术 | 第34-35页 |
| 2.3.5.2 建立酶偶联反应体系 | 第35页 |
| 2.3.5.3 温度对酶促反应的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.5.4 pH对酶促反应的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.6 信号分子AI-2 的制备与检测 | 第37页 |
| 2.3.6.1 信号分子AI-2 的制备 | 第37页 |
| 2.3.6.2 信号分子AI-2 的检测 | 第37页 |
| 2.3.7 生物膜实验 | 第37-39页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第39-50页 |
| 3.1 重组大肠杆菌S-腺苷高半胱氨酸核苷酶的克隆 | 第39-41页 |
| 3.1.1 目的基因sahn的PCR扩增 | 第39页 |
| 3.1.2 重组表达载体的抗性筛选 | 第39-40页 |
| 3.1.3 阳性表达载体的鉴定 | 第40页 |
| 3.1.4 测序结果及分析 | 第40-41页 |
| 3.2 重组大肠杆菌S-腺苷高半胱氨酸核苷酶的表达 | 第41-45页 |
| 3.2.1 SAHN蛋白的表达结果 | 第41页 |
| 3.2.2 目的蛋白浓度的测定及分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 目的蛋白的酶偶联分析检测方法的分析 | 第42页 |
| 3.2.4 SAHN酶反应动力学分析 | 第42-43页 |
| 3.2.5 温度对酶促反应影响的分析 | 第43-44页 |
| 3.2.6 pH对酶促反应影响的分析 | 第44-45页 |
| 3.3 重组大肠杆菌S-腺苷高半胱氨酸核苷酶的群感效应分析 | 第45-50页 |
| 3.3.1 SAHN酶蛋白在不同表达水平下信号分子AI-2 的检测 | 第45-46页 |
| 3.3.2 SAHN酶蛋白在不同表达水平下生物膜的检测 | 第46-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59页 |
