| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 ALA生理作用及其应用领域 | 第13-17页 |
| 1.1.1 生理作用 | 第13-14页 |
| 1.1.1.1 提高光合作用速率 | 第13-14页 |
| 1.1.1.2 影响呼吸作用 | 第14页 |
| 1.1.1.3 其它方面的作用 | 第14页 |
| 1.1.2 ALA的应用领域 | 第14-17页 |
| 1.1.2.1 作为绿色杀虫剂 | 第14页 |
| 1.1.2.2 作为绿色除草剂 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 提高作物产量 | 第15页 |
| 1.1.2.4 促进果实着色 | 第15-16页 |
| 1.1.2.5 光动力疗法治疗癌症 | 第16-17页 |
| 1.1.2.6 铅中毒的检验试剂 | 第17页 |
| 1.1.2.7 在临床上的其它作用 | 第17页 |
| 1.2 ALA的生产方法 | 第17-21页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第17-19页 |
| 1.2.1.1 马尿酸及琥珀酸为原料的合成方法 | 第17-18页 |
| 1.2.1.2 以糠醛、吡啶等杂环物质衍生物作为原料 | 第18页 |
| 1.2.1.3 以乙酰丙酸或其衍生物作为原料 | 第18-19页 |
| 1.2.2 生物合成法 | 第19-21页 |
| 1.2.2.1 诱变育种方法得到高产ALA的菌株 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 基因工程改造工程菌生产ALA | 第20-21页 |
| 1.3 ALA市场展望 | 第21页 |
| 1.3.1 市场前景 | 第21页 |
| 1.3.2 投资与效益分析 | 第21页 |
| 1.4 重组工程菌的发酵工艺控制 | 第21-22页 |
| 1.5 细胞膜通透性对发酵过程的影响 | 第22-23页 |
| 1.5.1 细胞膜对细胞的重要作用 | 第22页 |
| 1.5.2 改变细胞膜通透性对发酵过程的影响 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题拟研究内容和方向 | 第23-25页 |
| 第二章 大肠杆菌表达载体的构建 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-29页 |
| 2.3.1 ALA合成酶基因的选择 | 第27-28页 |
| 2.3.2 密码子优化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 PCR引物设计 | 第29页 |
| 2.3.4 hemO基因的合成 | 第29页 |
| 2.4 重组克隆质粒的构建 | 第29-34页 |
| 2.4.1 表达载体pET-21a质粒的提取 | 第29-31页 |
| 2.4.2 重组克隆载体和表达载体的分别双酶切 | 第31页 |
| 2.4.3 酶切片段的胶回收 | 第31-32页 |
| 2.4.4 构建表达载体pET-21a-hemO | 第32页 |
| 2.4.5 大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.4.6 pET-21a-hemO载体转化至大肠杆菌BL21 | 第33页 |
| 2.4.7 阳性克隆载体的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5 重组质粒的原核表达及蛋白的电泳检测 | 第34-36页 |
| 2.5.1 IPTG诱导pET-21a-hemO载体融合蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.5.2 外源基因编码翻译蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第35-36页 |
| 2.6 ALA检测方法 | 第36页 |
| 2.7 表达蛋白ALAS酶活的测定 | 第36页 |
| 2.8 ALA标准曲线的制作 | 第36-37页 |
| 2.9 实验结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.9.1 转化菌涂平板结果 | 第37页 |
| 2.9.2 质粒双酶切 | 第37-38页 |
| 2.9.3 目的蛋白表达的SDS-PAGE电泳检测 | 第38页 |
| 2.9.4 ALA标准曲线 | 第38-41页 |
| 第三章 重组大肠杆菌发酵培养条件的优化 | 第41-55页 |
| 3.1 重组大肠杆菌菌体生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| 3.2 IPTG添加及温度对蛋白表达的影响 | 第42-45页 |
| 3.2.1 IPTG作用原理 | 第42页 |
| 3.2.2 IPTG对生长曲线的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.3 IPTG的添加量对ALAS表达量的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.4 诱导后温度对ALAS产生量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3 前体以及抑制剂添加的单因素实验 | 第45-49页 |
| 3.3.1 甘氨酸添加量单因素实验 | 第46-47页 |
| 3.3.2 琥珀酸添加量单因素实验 | 第47-48页 |
| 3.3.3 乙酰丙酸添加量单因素实验 | 第48-49页 |
| 3.4 葡萄糖的添加对ALA产量的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 响应面实验 | 第50-55页 |
| 第四章 细胞通透性的改变对ALA产量的影响实验 | 第55-61页 |
| 4.1 细胞膜对细胞的重要作用 | 第55页 |
| 4.2 改变细胞膜通透性对发酵过程的影响 | 第55-58页 |
| 4.2.1 超声处理改变细胞膜通透性对ALA产量的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.2 反复冻融对ALA产量的影响 | 第57-58页 |
| 4.3 有机溶剂添加对ALA产量的影响 | 第58-60页 |
| 4.3.1 甲苯、正己烷和四氯化碳添加对ALA产量和菌体OD的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.2 正己烷对发酵过程ALA产量以及菌体OD值的影响 | 第59-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
