摘要 | 第9-11页 |
ABSTRACT | 第11-12页 |
前言 | 第13-16页 |
第一部分RSV感染对于MLE-12 产生CCL20的影响 | 第16-31页 |
研究背景 | 第16页 |
材料与方法 | 第16-27页 |
1. 材料 | 第16-19页 |
1.1 实验细胞和病毒 | 第16页 |
1.2 试剂及设备 | 第16-17页 |
1.3 主要液体配置方法 | 第17-19页 |
2. 方法 | 第19-26页 |
2.1 HEP-2 细胞复苏 | 第19-20页 |
2.2 HEP-2 细胞传代 | 第20页 |
2.3 HEP-2 细胞冻存 | 第20-21页 |
2.4 HEP-2 扩增RSV病毒 | 第21页 |
2.5 TCID50的操作步骤 | 第21-22页 |
2.6 RSV病毒刺激MLE-12 细胞 | 第22-23页 |
2.7 MLE-12 细胞提取RNA | 第23-24页 |
2.8 定时定量PCR(Real-time PCR) | 第24-25页 |
2.9 Thermo蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度 | 第25页 |
2.10 Western Blot | 第25-26页 |
3.统计方法 | 第26-27页 |
结果 | 第27-29页 |
1.RSV感染MLE-12 细胞CCL20基因表达结果 | 第27-28页 |
2.RSV感染MLE-12 细胞后CCL20相关信号通路分子升高 | 第28-29页 |
讨论 | 第29-31页 |
第二部分 阻断CCL20在OVA口服耐受小鼠RSV急性感染的作用 | 第31-50页 |
材料与方法 | 第31-39页 |
1. 材料 | 第31-33页 |
1.1 实验动物 | 第31页 |
1.2 试剂及设备 | 第31-32页 |
1.3 动物实验模型建立及分组 | 第32-33页 |
2. 实验方法 | 第33-38页 |
2.1 小鼠麻醉(腹腔注射) | 第33页 |
2.2 小鼠攻毒 | 第33-34页 |
2.3 小鼠血清IgE测定 | 第34-35页 |
2.4 肺组织取材及匀浆 | 第35页 |
2.5 肺组织HE切片制作 | 第35-36页 |
2.6 肺组织提取RNA | 第36页 |
2.7 淋巴细胞表面和胞内免疫荧光染色检测CCR6+IL-17+细胞 | 第36-38页 |
2.7.1 分离肺门淋巴结组织 | 第36-37页 |
2.7.2 细胞计数 | 第37页 |
2.7.3 淋巴细胞免疫荧光染色检测CCR6+且产生IL-17A的细胞 | 第37-38页 |
3.统计方法 | 第38-39页 |
结果 | 第39-46页 |
1.血清总IgE测定 | 第39-40页 |
2. BALF中的细胞总数及各类细胞数目的变化 | 第40页 |
3. 肺组织HE切片 | 第40-41页 |
4. 肺组织中细胞因子表达的变化 | 第41-42页 |
5. 肺门淋巴结流式检测CCR6+及CCR6+IL-17+细胞群 | 第42-46页 |
讨论 | 第46-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-53页 |
综述 | 第53-61页 |
参考文献 | 第57-61页 |
作者简介及读研期间主要科研成果 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |