| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 莱茵衣藻 | 第9-10页 |
| 1.1.1 莱茵衣藻的简介 | 第9页 |
| 1.1.2 莱茵衣藻作为模式生物的特点 | 第9-10页 |
| 1.2 纤毛 | 第10-13页 |
| 1.2.1 纤毛的简介 | 第10-11页 |
| 1.2.2 纤毛的结构 | 第11-12页 |
| 1.2.3 纤毛的功能 | 第12页 |
| 1.2.4 纤毛相关疾病 | 第12-13页 |
| 1.3 纤毛内运输(IFT) | 第13-14页 |
| 1.3.1 IFT的发现 | 第13页 |
| 1.3.2 IFT颗粒的组成 | 第13页 |
| 1.3.3 IFT的运动机制 | 第13-14页 |
| 1.4 大肠杆菌原核表达系统 | 第14-15页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达载体 | 第14页 |
| 1.4.2 表达宿主菌 | 第14-15页 |
| 1.4.3 融合表达系统 | 第15页 |
| 1.5 莱茵衣藻ift46基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.6 本实验的研究内容及研究意义 | 第17-18页 |
| 1.6.1 研究背景与意义 | 第17页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要药品 | 第19-22页 |
| 2.1.3 菌种和质粒 | 第22页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5 相关溶液的配制 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 莱茵衣藻ift46基因的获得及生物信息学分析 | 第25-27页 |
| 2.2.2 融合表达载体的构建 | 第27-31页 |
| 2.2.3 融合蛋白的表达 | 第31-32页 |
| 2.2.4 融合蛋白的纯化 | 第32-34页 |
| 2.2.5 免疫学实验 | 第34-35页 |
| 2.2.6 间接ELISA法测定抗体的效价 | 第35-36页 |
| 2.2.7 IFT46抗体的纯化 | 第36-39页 |
| 2.2.8 Western blotting特异性检测 | 第39-40页 |
| 2.2.9 衣藻细胞免疫荧光 | 第40-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-55页 |
| 3.1 莱茵衣藻ift46的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.2 大肠杆菌融合表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.2.1 大肠杆菌融合表达载体pGEX-2T-IFT46,pMAL-c2X-IFT46的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 重组质粒pGEX-2T-IFT46,pMAL-c2X-IFT46的双酶切验证 | 第44-45页 |
| 3.3 大肠杆菌融合蛋白的表达 | 第45-47页 |
| 3.3.1 GST-IFT46融合蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.3.2 MBP-IFT46融合蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.4 大肠杆菌融合蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| 3.4.1 GST融合蛋白的纯化 | 第47页 |
| 3.4.2 MBP融合蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| 3.5 免疫学实验 | 第48页 |
| 3.6 间接ELISA对抗体效价的测定 | 第48-50页 |
| 3.7 IFT46抗体的纯化 | 第50-53页 |
| 3.7.1 IFT46抗体的Protein A纯化 | 第50-52页 |
| 3.7.2 IFT46抗体的免疫亲和纯化 | 第52页 |
| 3.7.3 IFT46抗体的硝酸纤维素膜亲和纯化 | 第52-53页 |
| 3.8 Western blotting对抗体的专一性检测 | 第53-54页 |
| 3.9 Immunofluorescence检测IFT46在莱茵衣藻中的定位 | 第54-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-63页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64页 |
