| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| ·CRISPR/Cas系统简介 | 第11-12页 |
| ·CRISPR/Cas的分类 | 第12-13页 |
| ·CRISPR/Cas系统的发展历程 | 第13-14页 |
| ·CRISPR/Cas在基因编辑领域的应用 | 第14页 |
| ·七鳃鳗简介 | 第14-15页 |
| ·七鳃鳗功能基因的研究进展 | 第15-16页 |
| ·斑马鱼介绍 | 第16页 |
| ·Hox基因简介 | 第16-18页 |
| ·大片段敲除方面的研究进展 | 第18页 |
| ·科学问题假设及本研究所取得的一些成果 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-30页 |
| ·七鳃鳗和斑马鱼的来源与养殖条件 | 第20页 |
| ·所需实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验所需试剂 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·设计gRNA及两侧引物 | 第22-23页 |
| ·合成cas9 mRNA | 第23-25页 |
| ·合成gRNA | 第25-27页 |
| ·显微注射 | 第27页 |
| ·检测敲除是否成功及敲除效率 | 第27-29页 |
| ·单克隆测序分析 | 第29页 |
| ·成像 | 第29-30页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9系统介导的七鳃鳗双等位基因敲除方法的建立与优化 | 第30-42页 |
| ·实验结果 | 第30-38页 |
| ·CRISPR/Cas9系统成功地在七鳃鳗上实现了对wee1，soxe2，kctd10，wnt7b，golden的定点敲除 | 第30-32页 |
| ·注射了cas9和gol gRNA的亲本在早期胚胎产生了缺失表型 | 第32-36页 |
| ·单克隆测序检测对应注射胚胎中gol及kctd10的敲除效率 | 第36-38页 |
| ·单克隆检测发现wee1，soxe2，wnt7b敲除效率非常高但未观察到明显突变表型 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-42页 |
| ·CRISPR/Cas9系统对七鳃鳗基因组实现了高效的编辑效率 | 第38-39页 |
| ·T7E1酶切效率和单克隆测序突变效率的比较 | 第39页 |
| ·注射CRISPR/Cas9系统的七鳃鳗胚胎的表型分析 | 第39-40页 |
| ·gol的敲除效率比kctd10高，而突变后产生的表型率反而低 | 第40-41页 |
| ·CRISPR/Cas9作用于斑马鱼和七鳃鳗早期胚胎的差异比较 | 第41页 |
| ·本研究和已有研究对比 | 第41-42页 |
| 第四章 CRISPR/Cas9系统介导的斑马鱼Hox基因（簇）突变体的制备 | 第42-51页 |
| ·实验结果 | 第42-48页 |
| ·成功敲除HoxC1a、HoxC3a、HoxA2b、HoxB2a及HoxB7a五个基因 | 第42-44页 |
| ·成功敲除HoxB10a整个基因 | 第44-45页 |
| ·成功敲除HoxBa和HoxBb基因簇 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·单位点的敲除效率要远高于片段敲除效率 | 第48-50页 |
| ·片段敲除效率和片段大小之间的关系 | 第50页 |
| ·T7E1酶切效率和测序封图乱峰程度的比较 | 第50-51页 |
| 第五章 总结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
