| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-36页 |
| ·芽胞的研究综述 | 第14-22页 |
| ·芽胞的结构及芽胞的形成 | 第14-17页 |
| ·芽胞的结构 | 第14-16页 |
| ·芽胞的形成 | 第16-17页 |
| ·芽胞衣和芽胞外壁的结构组成与形成 | 第17-22页 |
| ·芽胞衣和芽胞外壁的结构组成 | 第17-19页 |
| ·芽胞衣和芽胞外壁的形成 | 第19-22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白 | 第22-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白 | 第22-26页 |
| ·杀虫晶体蛋白的分类 | 第22-23页 |
| ·杀虫晶体蛋白的定位 | 第23-24页 |
| ·晶体蛋白基因的表达调控 | 第24-26页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒研究进展 | 第26-29页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的分类 | 第26-27页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的功能研究 | 第27-29页 |
| ·编码毒素基因 | 第27页 |
| ·携带转座因子 | 第27-28页 |
| ·接合转移 | 第28-29页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒基因组的研究 | 第29页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群基因组的研究进展 | 第29-32页 |
| ·炭疽芽胞杆菌 | 第30-31页 |
| ·蜡状芽胞杆菌 | 第31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第31-32页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群其他菌株 | 第32页 |
| ·晶胞粘连现象研究的研究进展 | 第32-34页 |
| ·晶胞粘连现象的研究目的和意义 | 第34-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-51页 |
| ·实验材料 | 第36-42页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第36-40页 |
| ·供试抗生素 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·酶、试剂和试剂盒 | 第41页 |
| ·缓冲液及配方 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-51页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第42-44页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第42-43页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第43页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的快速制备 | 第43页 |
| ·苏云金芽胞杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第43-44页 |
| ·移码突变的构建策略 | 第44页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020基因组细菌人工染色体(BAC)文库制备 | 第44-46页 |
| ·基因组DNA片段的制备 | 第44-45页 |
| ·BAC载体的制备 | 第45页 |
| ·大肠杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·连接和转化 | 第46页 |
| ·文库的筛选与保存 | 第46页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020基因组穿梭BAC文库制备 | 第46-47页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020基因组测序与拼接 | 第47页 |
| ·覆盖质粒pBMB26和pBMB28全长的BAC克隆子的筛选 | 第47-48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020菌株基因中断突变子的筛选 | 第48-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020菌株基因中断载体的构建策略 | 第48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020菌株基因中断突变株的筛选及验证 | 第48-49页 |
| ·接合转移实验 | 第49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒稳定性检测 | 第49-50页 |
| ·苏云金芽胞杆菌伴胞晶体制备与电镜观察 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-88页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020基因组序列初步分析 | 第51-54页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020基因组的基本特征 | 第51-53页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020在蜡状芽胞杆菌群的分类地位 | 第53-54页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020晶胞粘连控制基因簇的克隆 | 第54-68页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020晶胞粘连控制基因的定位 | 第54-55页 |
| ·接合转移供体菌BMBJ1的获得 | 第54页 |
| ·接合转移受体菌BMB171R1的获得 | 第54页 |
| ·质粒pBMB26和pBMB28都和晶胞粘连表型相关 | 第54-55页 |
| ·质粒pBMB26和pBMB28中控制晶胞粘连表型区域的确定 | 第55-59页 |
| ·质粒pBMB26中控制晶胞粘连表型区域的确定 | 第56-57页 |
| ·质粒pBMB28中控制晶胞粘连表型区域的确定 | 第57-59页 |
| ·质粒pBMB26和pBMB28中控制晶胞粘连表型最小区域的确定 | 第59-61页 |
| ·控制晶胞粘连表型最小区域的生物信息学分析 | 第61-63页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020晶胞粘连必需基因的敲除验证 | 第63-68页 |
| ·质粒pBMB26中晶体蛋白基因cry26Aa的验证 | 第63-65页 |
| ·质粒pBMB28中基因orf1和orf2的验证 | 第65-67页 |
| ·质粒pBMB28中基因orf3-orf5验证 | 第67-68页 |
| ·晶体蛋白基因cry26Aa的启动子在晶胞粘连中不起关键作用 | 第68-69页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020晶胞粘连表型具有晶体蛋白的特异性 | 第69-70页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-020中晶体蛋白基因cry28Aa的作用 | 第70-73页 |
| ·质粒pBMB28中含有cry28Aa的克隆子可以延长晶体的稳定时间 | 第71-72页 |
| ·晶体蛋白基因cry28Aa的表达促进了伴胞晶体的稳定 | 第72-73页 |
| ·质粒pBMB26序列分析及复制子克隆与鉴定 | 第73-83页 |
| ·质粒pBMB26基本特征 | 第73-74页 |
| ·质粒pBMB26复制子克隆与鉴定 | 第74-83页 |
| ·质粒复制子克隆载体的构建 | 第74-75页 |
| ·鉴定12kb的EcoRI包含了pBMB26的复制区 | 第75-76页 |
| ·质粒pBMB26最小复制功能域的确定及分析 | 第76-78页 |
| ·质粒pBMB26复制起始位点Ori的确定 | 第78-80页 |
| ·GST-标签的ORF70和Ori之间存在蛋白质和DNA相互作用 | 第80-81页 |
| ·最小复制子的复制稳定性和pBMB26的拷贝数 | 第81页 |
| ·利用最小复制子pRep7构建穿梭载体 | 第81-82页 |
| ·质粒pBMB26最小复制区在B.cereus群中的分布 | 第82-83页 |
| ·质粒pBMB28序列分析及相关基因功能验证 | 第83-88页 |
| ·质粒pBMB28基本特征 | 第83页 |
| ·质粒pBMB28复制子克隆与鉴定及在质粒消除中的应用 | 第83-86页 |
| ·质粒pBMB28复制子的克隆 | 第83-84页 |
| ·质粒pBMB28最小复制区的鉴定 | 第84-85页 |
| ·利用质粒不相容性消除质粒pBMB28及表型观察 | 第85-86页 |
| ·质粒pBMB28接合转移区克隆与鉴定 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| ·基因组分析YBT-020进化关系上更接近炭疽芽胞杆菌 | 第88-89页 |
| ·采用构建BAC文库的方式筛选晶胞粘连控制基因 | 第89页 |
| ·晶胞粘连现象形成模式的推测 | 第89页 |
| ·在不同亚种中晶胞粘连表型控制基因不同 | 第89-90页 |
| ·cry26Aa和cry28Aa基因的共表达可以有效的稳定伴胞晶体 | 第90页 |
| ·质粒pBMB26的复制子为一种新型的复制子 | 第90-92页 |
| 5 总结与创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 已发表和待发表文献及申请专利 | 第106页 |
