| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1 肌酸激酶 | 第10-12页 |
| ·肌酸激酶的概述 | 第10-11页 |
| ·肌酸激酶的折叠 | 第11页 |
| ·肌酸激酶临床诊断意义 | 第11页 |
| ·人脑型肌酸激酶 | 第11-12页 |
| 2 蛋白质的折叠 | 第12-14页 |
| ·蛋白质折叠的概述 | 第12页 |
| ·蛋白质的体内外折叠 | 第12-13页 |
| ·蛋白质折叠的研究方法 | 第13页 |
| ·折叠病 | 第13-14页 |
| 3 大分子拥挤体系 | 第14页 |
| 4 单核苷酸多态性 | 第14-17页 |
| ·单核苷酸多态性的概述 | 第14-15页 |
| ·研究 SNP 的意义 | 第15页 |
| ·SNP 数据库 | 第15-17页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第17-19页 |
| 1 研究的目的及意义 | 第17页 |
| 2 研究的主要内容 | 第17-18页 |
| 3 实验方案 | 第18-19页 |
| 第三章 人脑型肌酸激酶及其突变体的表达纯化 | 第19-29页 |
| 1 材料与试剂 | 第19-22页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-22页 |
| 2 方法 | 第22-26页 |
| ·活化菌种并提取质粒 | 第22页 |
| ·CaCl_2法制备 E.coli BL21（DE3）感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·E.coli BL21（DE3）感受态细胞的转化 | 第23页 |
| ·诱导表达目的蛋白 | 第23页 |
| ·DAEA Fast Flow 阴离子交换层析 | 第23-24页 |
| ·透析袋的处理 | 第24页 |
| ·HiLoad~(TM)16/600 Superdex 分子筛凝胶过滤层析 | 第24-25页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-27页 |
| ·HCKB-K177R 过 DAEA Fast Flow 阴离子交换柱 | 第26-27页 |
| ·HCKB-WT 和 HCKB-K177R 过分子筛的鉴定 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第四章 定点突变对脑型肌酸激酶去折叠过程的影响 | 第29-41页 |
| 1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·试剂配制 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-33页 |
| ·pH-比色法测肌酸激酶活 | 第30页 |
| ·BCA 法测定蛋白浓度 | 第30-31页 |
| ·盐酸胍对 HBCK-WT 及 HBCK-K177R 酶活的影响 | 第31页 |
| ·盐酸胍变性的动力学参数的测定 | 第31-32页 |
| ·DNTB 法测定点突变对巯基暴露的影响 | 第32页 |
| ·定点突变对 HBCK 酪氨酸暴露水平 | 第32-33页 |
| ·内源荧光光谱的测定 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-40页 |
| ·盐酸胍浓度对酶活的影响 | 第33-34页 |
| ·盐酸胍变性的动力学参数 | 第34-36页 |
| ·巯基暴露水平的差异 | 第36-37页 |
| ·酪氨酸暴露水平 | 第37-39页 |
| ·内源荧光光谱的测定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第五章 突变体在大分子拥挤体系下的重折叠 | 第41-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·试剂配置 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-42页 |
| ·直接稀释复性 | 第41-42页 |
| ·含大分子拥挤试剂 PEG2000 下的稀释复性 | 第42页 |
| ·含大分子拥挤试剂 Dextran 70 下的稀释复性 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-46页 |
| ·直接稀释对 HBCK-WT 及 HBCK-K177R 复性动力学的影响 | 第42-43页 |
| ·大分子试剂对 HBCK-WT 及 HBCK-K177R 折叠的影响 | 第43-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
