| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-35页 |
| 1 幽门螺杆菌感染与胃癌 | 第19-24页 |
| ·幽门螺杆菌生物学性状 | 第19-20页 |
| ·幽门螺杆菌的致病机制 | 第20-22页 |
| ·幽门螺杆菌的鞭毛 | 第20页 |
| ·幽门螺杆菌的毒力因子 | 第20-21页 |
| ·幽门螺杆菌的毒素 | 第21页 |
| ·幽门螺杆菌主要致病性酶和代谢产物 | 第21-22页 |
| ·幽门螺杆菌所致的炎症反应与胃癌 | 第22-23页 |
| ·幽门螺杆菌与NF-κB信号通路 | 第23-24页 |
| 2 MSCs与炎症微环境 | 第24-27页 |
| ·MSCs的生物学特性 | 第25页 |
| ·MSCs炎症趋化性并参与炎症微环境的形成 | 第25-26页 |
| ·MSCs与癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs) | 第26-27页 |
| ·癌相关成纤维细胞 | 第26-27页 |
| ·癌相关成纤维细胞与MSCs | 第27页 |
| 3 CAFs与肿瘤发生 | 第27-28页 |
| 4 上皮间质化与肿瘤 | 第28-32页 |
| ·EMT概念 | 第28-29页 |
| ·EMT发生机制简述 | 第29-30页 |
| ·EMT与肿瘤 | 第30页 |
| ·EMT与肿瘤侵袭转移 | 第30-31页 |
| ·EMT与肿瘤干细胞 | 第31-32页 |
| 5 本论文研究目的、方法、技术路线及意义 | 第32-35页 |
| ·研究目的 | 第32页 |
| ·研究方法 | 第32-33页 |
| ·技术路线 | 第33-34页 |
| ·研究意义 | 第34-35页 |
| 第二章 幽门螺杆菌对人脐带间质干细胞的作用 | 第35-55页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备及相关耗材 | 第36-37页 |
| ·幽门螺杆菌 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-44页 |
| ·幽门螺杆菌的复苏培养、鉴定与冻存 | 第37-39页 |
| ·培养基配制 | 第37页 |
| ·冻存液的配制 | 第37-38页 |
| ·幽门螺杆菌的复苏培养 | 第38页 |
| ·幽门螺杆菌的鉴定 | 第38-39页 |
| ·幽门螺杆菌的冻存 | 第39页 |
| ·不同浓度菌液的配制 | 第39页 |
| ·hucMSCs的分离培养、扩增及准备 | 第39-40页 |
| ·hucMSCs的分离培养与扩增 | 第39-40页 |
| ·hucMSCs细胞的准备 | 第40页 |
| ·H.pylori与hucMSCs细胞共培养 | 第40页 |
| ·总RNA提取、逆转录和定量RT.PCR | 第40-42页 |
| ·总RNA提取 | 第41页 |
| ·逆转录 | 第41-42页 |
| ·实时定量PCR | 第42页 |
| ·Western blot | 第42-43页 |
| ·Transwell迁移试验检测H.pylori对hucMSCs细胞的募集 | 第43页 |
| ·手工计数法测定H.pylori刺激培养的hucMSCs对SGC7901细胞增殖的影响 | 第43页 |
| ·Transwell迁移实验检测H.pylori刺激培养的hucMSCs对胃癌细胞SGC-7901的迁移作用 | 第43-44页 |
| ·统计分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-52页 |
| ·H.pylori鉴定结果 | 第44页 |
| ·H.pylori与hucMSCs以不同感染指数培养不同时间后hucMSCs的形态变化 | 第44-47页 |
| ·H.pylori体外诱导hucMSCs向CAFs样细胞转化 | 第47-48页 |
| ·H.pylori体外促进hucMSCs的迁移 | 第48-49页 |
| ·H.pylori刺激培养hucMSCs的上清对SGC-7901细胞生长无促进作用 | 第49-50页 |
| ·H.pylori刺激培养hucMSCs的上清对SGC7901细胞凋亡相关蛋白表达的影响 | 第50页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清促进胃癌细胞要SGC-7901的迁移 | 第50-51页 |
| ·H.pylori刺激培养hucMSCs的上清体外诱导SGC7901细胞EMT样分化 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第三章 CAFs样转化的MSCs对正常胃上皮细胞的作用 | 第55-71页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·主要试剂或材料 | 第55-56页 |
| ·主要仪器设备及相关耗材 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-59页 |
| ·GES-1细胞及hucMSCs的培养 | 第56-57页 |
| ·GES-1细胞的培养 | 第56页 |
| ·hucMSCs的培养 | 第56-57页 |
| ·H.pylori刺激培养hucMSCs细胞的条件及培养基(CM)的制备 | 第57页 |
| ·用H.pylori刺激培养的hucMSCs上清对GES-1胃上皮细胞培养 | 第57页 |
| ·RNA的提取及逆转录 | 第57页 |
| ·实时定量PCR | 第57页 |
| ·Western blot检测相关蛋白的表达 | 第57-58页 |
| ·MTT细胞增殖试验及手工计数法测定细胞生长曲线 | 第58页 |
| ·Transwell法检测H.pylori刺激培养的hucMSCs对胃上皮细胞的迁移作用 | 第58页 |
| ·平板克隆试验 | 第58页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第58-59页 |
| ·统计分析 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-67页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清促使胃上皮细胞GES-1形态变化 | 第59-60页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清诱导胃上皮细胞发生EMT | 第60-62页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs促进胃上皮细胞GES-1的迁移 | 第62-63页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清对胃上皮细胞增殖及凋亡的影响 | 第63-65页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs对胃上皮细胞干性和癌基因及抑癌基因的影响 | 第65-66页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清促进胃上皮细胞GES-1克隆形成 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第四章 H.pylori促进hucMSCs CAFs样转化过程细胞因子的分泌 | 第71-83页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·主要试剂和材料 | 第71页 |
| ·主要仪器设备及相关耗材 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·免疫磁珠流式细胞仪液相芯片技术(Luminex flow cytometry,Luminex)筛检H.pylori刺激培养MSCs上清中相关因子分泌 | 第72页 |
| ·IL-6、IL-8及PDGF-DD等的ELISA检测 | 第72-73页 |
| ·RNA的提取及逆转录 | 第73-74页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第74页 |
| ·Western blot检测IL-6刺激培养GES-1细胞后EMT相关基因的蛋白表达 | 第74页 |
| ·Transwell法检测IL-6对正常胃上皮细胞的迁移作用 | 第74页 |
| ·平板克隆试验 | 第74页 |
| ·统计学分析 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·H.pylori刺激培养的hucMSCs上清中细胞因子的液体芯片筛检结果 | 第74-75页 |
| ·ELISA法对上一步筛选出的部分因子做进一步验证 | 第75-76页 |
| ·体外IL-6诱导胃上皮细胞GES-1发生EMT | 第76-78页 |
| ·体外IL-6促进胃上皮细胞GES-1的迁移 | 第78页 |
| ·体外IL-6促进胃上皮细胞GES-1增殖或克隆形成 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-83页 |
| 第五章 NF-κB参与MSCs在H.pylori感染过程中对胃上皮细胞的作用 | 第83-97页 |
| ·材料 | 第83-84页 |
| ·主要试剂 | 第83-84页 |
| ·主要仪器设备及相关耗材 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-87页 |
| ·PDTC的配制 | 第84页 |
| ·PDTC对H.pylori刺激培养hucMSCs的NF-κB抑制实验 | 第84-85页 |
| ·PDTC抑制前后H.pylori刺激培养的hucMSCs上清对GES-1胃上皮细胞培养 | 第85页 |
| ·总蛋白提取 | 第85页 |
| ·胞质蛋白提取 | 第85页 |
| ·核蛋白提取 | 第85-86页 |
| ·总RNA提取 | 第86页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第86页 |
| ·Western blot | 第86页 |
| ·Transwell法检测NF-κB特异性抑制剂PDTC预处理后H.pylori刺激培养的hucMSCs对GES-1细胞的迁移实验 | 第86页 |
| ·平板克隆试验 | 第86页 |
| ·统计学分析 | 第86-87页 |
| ·结果 | 第87-92页 |
| ·H.pylori促使hucMSCs细胞NF-κB活化(核转位) | 第87-88页 |
| ·PDTC抑制H.pylori体外诱导hucMSCs向CAFs样细胞分化 | 第88-89页 |
| ·H.pylori诱导hucMSCs细胞因子的分泌部分依赖NF-κB活化 | 第89页 |
| ·PDTC可部分逆转H.pylori刺激培养的hucMSCs上清对GES-1细胞EMT | 第89-90页 |
| ·PDTC预处理后H.pylori刺激培养的hucMSCs上清减弱GES-1细胞迁移能力 | 第90-91页 |
| ·PDTC预处理后H pylori刺激培养的hucMSCs上清降低GES-1细胞的克隆形成 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·小结 | 第94-97页 |
| 第六章 结论与展望 | 第97-99页 |
| ·主要结论 | 第97页 |
| ·本研究的创新点 | 第97页 |
| ·展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 在学期间发表的论文 | 第111页 |
