| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 插图和附表 | 第15-18页 |
| 英文缩略表 | 第18-19页 |
| 昆虫拉丁名对照表 | 第19-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-42页 |
| ·Cry毒素简介 | 第20-26页 |
| ·Cry毒素的三维结构 | 第20-25页 |
| ·Cry毒素上与受体结合的氨基酸区域 | 第25-26页 |
| ·Cry毒素对鳞翅目害虫的作用机制 | 第26-32页 |
| ·补充的Cry毒素作用模型 | 第26-29页 |
| ·Cry毒素寡聚化和成孔能力 | 第29-30页 |
| ·插入细胞膜后Cry毒素的构象变化 | 第30-32页 |
| ·受体的鉴定及其在Cry毒素作用中的功能 | 第32-39页 |
| ·受体钙粘蛋白的结构与功能 | 第32-35页 |
| ·GPI锚定的受体的结构与功能 | 第35-37页 |
| ·糖酯（Glycolipid） | 第37页 |
| ·肌动蛋白（Actin） | 第37页 |
| ·ABC蛋白（ATP-bindingcassette） | 第37-39页 |
| ·其它受体 | 第39页 |
| ·Cry1Ah蛋白与Cry1Ai蛋白 | 第39-40页 |
| ·研究目的与意义 | 第40页 |
| ·立题依据 | 第40页 |
| ·主要研究课题的来源及主要研究内容 | 第40-42页 |
| ·课题来源 | 第40-41页 |
| ·研究内容 | 第41-42页 |
| 第二章 Cry1Ah蛋白突变体的构建 | 第42-58页 |
| ·实验材料与试剂 | 第42-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第42-43页 |
| ·定点突变引物 | 第43-44页 |
| ·供试昆虫 | 第44页 |
| ·酶与生化试剂 | 第44-45页 |
| ·培养基与抗生素 | 第45页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·三维结构预测与序列比对分析 | 第47页 |
| ·定点突变 | 第47页 |
| ·感受态制备与转化 | 第47-48页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第49页 |
| ·序列测定及分析 | 第49页 |
| ·突变体表达 | 第49页 |
| ·晶体形态观察 | 第49页 |
| ·Cry蛋白提取及SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·棉铃虫生物活性测定 | 第50页 |
| ·实验结果与分析 | 第50-56页 |
| ·Cry1Ah蛋白结构与分析 | 第50-51页 |
| ·Cry1Ah蛋白三维结构预测 | 第51页 |
| ·突变位点选择 | 第51-53页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第53页 |
| ·晶体形态观察 | 第53-54页 |
| ·生物活性分析 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第三章 Cry1Ai蛋白对小菜蛾活性区域的确定 | 第58-77页 |
| ·材料与试剂 | 第58-61页 |
| ·菌株与质粒 | 第58-59页 |
| ·截短引物 | 第59-60页 |
| ·供试昆虫 | 第60-61页 |
| ·酶与生化试剂 | 第61页 |
| ·培养基与抗生素 | 第61页 |
| ·常用溶液与缓冲液 | 第61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-65页 |
| ·Cry1Ai蛋白三维结构预测和序列分析 | 第61页 |
| ·截短片段的构建 | 第61-62页 |
| ·PCR产物回收与质粒提取 | 第62页 |
| ·目的片段与载体的酶切与连接 | 第62页 |
| ·感受态细胞的制备与转化 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第63页 |
| ·序列测定及分析 | 第63页 |
| ·截短片段在大肠杆菌BL21中的表达 | 第63-64页 |
| ·小菜蛾生物活性测定 | 第64-65页 |
| ·实验结果与分析 | 第65-75页 |
| ·Cry1Ai蛋白三维结构预测与分析 | 第65-66页 |
| ·Cry1Ai蛋白截短位点的选择 | 第66-67页 |
| ·第一轮截短片段的构建 | 第67-68页 |
| ·第一轮截短片段在大肠杆菌BL21中的表达 | 第68-69页 |
| ·第一轮截短片段的生物活性分析 | 第69页 |
| ·第二轮截短片段的构建 | 第69-71页 |
| ·第二轮截短片段在大肠杆菌BL21中的表达 | 第71-72页 |
| ·第二轮截短片段的生物活性分析 | 第72-75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第四章 Cry1Ah蛋白杀虫特异性相关受体分析 | 第77-93页 |
| ·实验材料与试剂 | 第77-79页 |
| ·菌株与质粒 | 第77页 |
| ·供试昆虫 | 第77页 |
| ·酶与生化试剂 | 第77-78页 |
| ·培养基与抗生素 | 第78页 |
| ·常用试剂 | 第78-79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·Bt中Cry1Ah蛋白和Cry1Ac蛋白的提取 | 第79页 |
| ·大肠杆菌中Cry1Ai蛋白的提取 | 第79页 |
| ·Cry蛋白的活化 | 第79-80页 |
| ·Cry蛋白的纯化 | 第80页 |
| ·BBMV的提取 | 第80页 |
| ·Cry蛋白的偶联 | 第80-81页 |
| ·配体垂钓平台分析结合蛋白 | 第81页 |
| ·不连续浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第81页 |
| ·蛋白条带的质谱检测 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-91页 |
| ·Cry1Ah和Cry1Ac蛋白的提取及活化 | 第82页 |
| ·Cry1Ah和Cry1Ac蛋白的纯化 | 第82-83页 |
| ·Cry1Ai蛋白的提取及活化 | 第83-84页 |
| ·活化的Cry1Ai蛋白的纯化 | 第84-85页 |
| ·BBMV的提取 | 第85页 |
| ·利用配体垂钓平台分析Cry毒素结合蛋白的差异 | 第85-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第五章 Cry1Ah蛋白DomainⅡ的Loop区域与杀虫特异性关系 | 第93-108页 |
| ·材料与试剂 | 第93-95页 |
| ·菌株与质粒 | 第93页 |
| ·引物 | 第93-94页 |
| ·供试昆虫 | 第94页 |
| ·酶与生化试剂 | 第94-95页 |
| ·培养基与抗生素 | 第95页 |
| ·常用试剂 | 第95页 |
| ·主要仪器设备 | 第95页 |
| ·实验方法 | 第95-97页 |
| ·序列分析软件 | 第95页 |
| ·反向PCR | 第95-96页 |
| ·磷酸化处理（BKL试剂盒） | 第96页 |
| ·连接与转化 | 第96页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第96页 |
| ·酶切连接方法 | 第96-97页 |
| ·感受态细胞制备 | 第97页 |
| ·大肠杆菌中蛋白诱导表达 | 第97页 |
| ·棉铃虫生物活性测定 | 第97页 |
| ·家蚕生物活性测定 | 第97页 |
| ·结果与分析 | 第97-106页 |
| ·Cry1Ah和Cry1Ai蛋白三维结构及氨基酸序列的比较 | 第97-98页 |
| ·突变体的构建与表达 | 第98-99页 |
| ·反向PCR产物的连接与转化 | 第99-100页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第100-101页 |
| ·突变体的表达分析 | 第101-102页 |
| ·棉铃虫生物活性分析 | 第102-104页 |
| ·家蚕生物活性分析 | 第104-106页 |
| ·讨论 | 第106-107页 |
| ·小结 | 第107-108页 |
| 第六章 全文结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 作者简历 | 第130-131页 |
