| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 前言 | 第14-15页 |
| 2 影响脂肪代谢的基因 | 第15-21页 |
| ·影响脂肪代谢的基因 | 第15-18页 |
| ·乙酰辅酶A羧化酶 | 第15-16页 |
| ·脂肪酸合成酶 | 第16页 |
| ·脂肪酸结合蛋白 | 第16-17页 |
| ·脂蛋白脂酶 | 第17页 |
| ·激素敏感脂肪酶 | 第17页 |
| ·过氧化物酶体增殖蛋白激活受体γ | 第17-18页 |
| ·DGAT1基因研究现状 | 第18-21页 |
| ·DGAT1基因的结构特征与生物学特征 | 第18-19页 |
| ·DGAT1基因的生物学功能 | 第19-21页 |
| 3 肌肉肌酸激酶 | 第21-22页 |
| 4 转基因技术研究进展 | 第22-26页 |
| ·原核显微注射 | 第22页 |
| ·精子载体介导法 | 第22-23页 |
| ·病毒介导载体法 | 第23页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第23-24页 |
| ·体细胞克隆技术 | 第24-26页 |
| ·体细胞克隆技术 | 第24页 |
| ·体细胞克隆猪的应用 | 第24-26页 |
| 第二章 研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第三章 材料与方法 | 第27-54页 |
| 1 材料 | 第27-33页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第28-29页 |
| ·常用化学试剂及其配制 | 第29-32页 |
| ·培养基的配制 | 第29页 |
| ·其他主要化学试剂的配制 | 第29-32页 |
| ·载体 | 第32页 |
| ·主要分子生物学软件及数据库 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-54页 |
| ·sMCK-sDGAT1载体的构建 | 第33-36页 |
| ·pEGFP-N1L-MCK载体的双酶切 | 第33-34页 |
| ·pMD18-DGAT1载体的双酶切 | 第34页 |
| ·连接载体和基因DGAT1片段 | 第34-35页 |
| ·sMCK-sDGAT1载体的鉴定和线性化 | 第35-36页 |
| ·sMCK-sDGAT1载体的线性化和回收 | 第36页 |
| ·转基因小鼠制备与表达检测 | 第36-47页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第36页 |
| ·转基因小鼠F1代的制备 | 第36-37页 |
| ·转基因小鼠F1代DNA水平的检测 | 第37-41页 |
| ·转基因小鼠F1代RNA水平的检测 | 第41-43页 |
| ·转基因小鼠骨骼肌相关基因蛋白水平的检测 | 第43-45页 |
| ·转基因小鼠骨骼肌甘油三酯、脂肪酸的测定和脂肪染色 | 第45-47页 |
| ·猪胚胎成纤维转基因细胞系的建立与检测 | 第47-50页 |
| ·猪胚胎成纤维细胞系的建立 | 第47-49页 |
| ·转基因细胞系的建立与检测 | 第49-50页 |
| ·转基因猪的制备和初步分子检测 | 第50-54页 |
| ·转基因猪的制备 | 第50-51页 |
| ·转基因猪的初步分子检测 | 第51-54页 |
| 第四章 结果与分析 | 第54-68页 |
| 1 sMCK-sDGAT1载体的构建 | 第54-56页 |
| ·pMD18-DGAT1载体的双酶切 | 第54页 |
| ·sMCK-sDGAT1载体的鉴定和线性化 | 第54-56页 |
| 2 转基因小鼠的验证 | 第56-62页 |
| ·转基因小鼠gDNA的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转基因小鼠的Southern Blot检测 | 第57-58页 |
| ·转基因小鼠的组织表达谱 | 第58-59页 |
| ·检测DGAT1上调对骨骼肌相关基因表达的影响分析 | 第59-60页 |
| ·转基因小鼠的Western blot检测 | 第60-61页 |
| ·转基因小鼠8-18周龄体重变化 | 第61页 |
| ·转基因小鼠骨骼肌甘油三酯和脂肪酸的测定 | 第61页 |
| ·转基因小鼠骨骼肌的脂肪染色 | 第61-62页 |
| 3 猪胚胎成纤维细胞系的建立 | 第62-65页 |
| ·建立猪胚胎成纤维细胞系 | 第62页 |
| ·猪30d日龄胚胎性别的鉴定 | 第62-63页 |
| ·大白猪胎儿成纤维细胞对G418敏感性的检测 | 第63页 |
| ·转sMCK-sDGAT1载体的细胞单克隆的筛选 | 第63-64页 |
| ·转sMCK-sDGAT1载体的细胞单克隆的分子鉴定 | 第64-65页 |
| 4 转sMCK-sDGAT1载体克隆猪的初步鉴定 | 第65-68页 |
| ·转sMCK-sDGAT1载体克隆猪的DNA鉴定 | 第65-66页 |
| ·绝对定量PCR对外源基因拷贝数的检测 | 第66-68页 |
| 第五章 讨论 | 第68-73页 |
| 1 对转基因动物的鉴定 | 第68页 |
| 2 脂肪代谢相关基因的表达情况 | 第68-70页 |
| ·ACC1 | 第69页 |
| ·FABP4 | 第69-70页 |
| ·UCP1 | 第70页 |
| 3 骨骼肌肌内脂肪的沉积 | 第70-71页 |
| 4 制备转基因克隆猪 | 第71页 |
| 5 对转基因克隆猪外源基因拷贝数的检测 | 第71-73页 |
| 第六章 结论 | 第73-76页 |
| 1 主要研究成果 | 第73-74页 |
| 2 主要创新点 | 第74页 |
| 3 本研究的不足之处 | 第74页 |
| 4 下一步工作计划 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 附录1 载体sMCK-sDGAT1序列 | 第88-93页 |
| 附录2 转基因小鼠RT-PCR引物 | 第93-94页 |
| 在读期间发表的文章 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
