| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 縮略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-41页 |
| 1 蛋白质的乙酰化研究进展 | 第13-29页 |
| ·N末端乙酰化修饰(N~α-乙酰化) | 第14-15页 |
| ·赖氨酸乙酰化修饰(N~ε-乙酰化) | 第15-27页 |
| ·真核生物中组蛋白的赖氨酸乙酰化 | 第15-18页 |
| ·真核生物中非组蛋白的赖氨酸乙酰化 | 第18-19页 |
| ·原核生物中的赖氨酸乙酰化 | 第19-20页 |
| ·赖氨酸乙酰转移酶/组蛋白乙酰转移酶 | 第20-22页 |
| ·赖氨酸去乙酰化酶/组蛋白去乙酰化酶 | 第22-24页 |
| ·Sir2类蛋白质去乙酰化酶 | 第24-27页 |
| ·蛋白质乙酰化修饰的检测 | 第27-29页 |
| 2 NATs蛋白家族研究进展 | 第29-37页 |
| ·NATs蛋白家族的分布 | 第30-32页 |
| ·NATs蛋白的结构 | 第32-34页 |
| ·NATs蛋白的作用机制 | 第34-36页 |
| ·NATs蛋白的抑制剂 | 第36-37页 |
| 3 蛋白质芯片研究进展 | 第37-40页 |
| ·蛋白质芯片的特点 | 第37-38页 |
| ·蛋白质芯片的种类 | 第38页 |
| ·蛋白质芯片的检测和应用 | 第38-39页 |
| ·结束语 | 第39-40页 |
| 4 本研究的主要目的和意义 | 第40-41页 |
| 第二章 大肠杆菌CobB蛋白底物的筛选以及催化NhoA去乙酰化的研究 | 第41-66页 |
| 1 材料与方法 | 第42-50页 |
| ·试验材料 | 第42-45页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·试剂与材料 | 第43页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE凝胶溶液 | 第44页 |
| ·Western Blot用缓冲液 | 第44-45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·蛋白质芯片的构建和CobB底物的筛选 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度及蛋白浓缩 | 第47-48页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保存 | 第48页 |
| ·去乙酰化试验 | 第48页 |
| ·蛋白质的免疫印迹(Western blot)检测 | 第48-49页 |
| ·蛋白质的质谱鉴定 | 第49-50页 |
| ·自乙酰化试验 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-64页 |
| ·基于大肠杆菌蛋白质芯片的CobB底物的筛选 | 第50-53页 |
| ·大肠杆菌CobB蛋白与NhoA蛋白的表达与纯化 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌CobB催化NhoA的去乙酰化 | 第54-55页 |
| ·NhoA乙酰化与去乙酰化的质谱鉴定 | 第55-62页 |
| ·NhoA蛋白的自乙酰化分析 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 乙酰化赖氨酸残基的突变对大肠杆菌NhoA酶活性的影响 | 第66-94页 |
| 1 材料与方法 | 第67-80页 |
| ·试验材料 | 第67-70页 |
| ·菌株与质粒 | 第67-68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·试剂与材料 | 第69页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第69页 |
| ·SDS-PAGE凝胶溶液 | 第69-70页 |
| ·Western Blot用缓冲液 | 第70页 |
| ·ELISA用试剂 | 第70页 |
| ·试验仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-80页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第70页 |
| ·大肠杆菌nhoA基因的定点突变及克隆 | 第70-73页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法感受态细胞的的制备及转化 | 第73页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第73页 |
| ·菌种的保存 | 第73-74页 |
| ·蛋白质的诱导表达及纯化 | 第74页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度及蛋白浓缩 | 第74页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保藏 | 第74页 |
| ·NhoA抗体的制备 | 第74-75页 |
| ·突变体蛋白的可溶性分析 | 第75页 |
| ·蛋白的免疫印迹(Western blot)检测 | 第75页 |
| ·NhoA的NAT活性测定 | 第75页 |
| ·大肠杆菌单基因敲除菌株的构建 | 第75-80页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第80页 |
| ·诱变性试验 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-90页 |
| ·大肠杆菌nhoA野生型及突变体基因表达载体的构建 | 第80-81页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第81-82页 |
| ·大肠杆菌NhoA野生型及突变体蛋白可溶性分析 | 第82-84页 |
| ·大肠杆菌NhoA野生型及突变体蛋白乙酰化水平分析 | 第84-85页 |
| ·大肠杆菌NhoA野生型及突变体蛋白NAT活性的对比 | 第85-86页 |
| ·大肠杆菌NhoA野生型及突变体蛋白OAT活性的对比 | 第86-90页 |
| ·大肠杆菌nhoA基因敲除菌株的构建 | 第86-88页 |
| ·OAT活性的测定 | 第88-90页 |
| 3 讨论 | 第90-94页 |
| 第四章 大肠杆菌CobB蛋白调节NhoA酶活性的研究 | 第94-105页 |
| 1 材料与方法 | 第94-98页 |
| ·试验材料 | 第94-96页 |
| ·菌株和质粒 | 第94-95页 |
| ·培养基 | 第95页 |
| ·试剂与材料 | 第95-96页 |
| ·蛋白纯化缓冲液 | 第96页 |
| ·SDS-PAGE凝胶溶液 | 第96页 |
| ·Western Blot用缓冲液 | 第96页 |
| ·试验仪器 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96-98页 |
| ·蛋白质的诱导表达及纯化 | 第96页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度及蛋白浓缩 | 第96页 |
| ·蛋白质浓度的测定及保藏 | 第96页 |
| ·蛋白的免疫印迹(Western blot)检测 | 第96页 |
| ·去乙酰化NhoA的NAT活性测定 | 第96-97页 |
| ·大肠杆菌单基因和双基因敲除菌株的构建 | 第97页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第97页 |
| ·大肠杆菌体内NhoA乙酰化水平分析 | 第97-98页 |
| ·诱变性试验 | 第98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-103页 |
| ·去乙酰化对NhoA的NAT活性的影响 | 第98-100页 |
| ·大肠杆菌cobB敲除菌株及cobB与nhoA双敲除菌株的构建 | 第100-101页 |
| ·大肠杆菌体内NhoA乙酰化水平分析 | 第101-102页 |
| ·cobB基因敲除对NhoA的OAT活性的影响 | 第102-103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 第五章 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-119页 |
| 发表及待发表文章目录 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
