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李属坏死环斑病毒遗传多样性分析和致病相关基因鉴定

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-14页
縮略词表第14-16页
第一章 文献综述第16-36页
 1 核果类果树病毒的种类、分布及危害第16-18页
 2 李属坏死环斑病毒的寄主范围及危害特点第18-19页
   ·寄主范围第18页
   ·危害特点第18-19页
 3 PNRSV的分类地位及生物学特性第19-21页
   ·分类地位第19页
   ·病毒粒子形态特征第19-20页
   ·病害症状第20页
   ·传播途径第20-21页
 4 PNRSV的分子生物学特性第21-26页
   ·基因组结构第21页
   ·PNRSV各基因编码蛋白的特征和功能第21-26页
     ·复制酶相关蛋白P1和P2第21-23页
     ·MP和CP介导的病毒运动第23-24页
     ·CP在病毒复制、翻译和侵染中的角色第24-26页
 5 PNRSV的株系划分及血清型第26-28页
 6 PNRSV的检测技术第28-30页
   ·生物学检测第28-29页
   ·血清学检测第29页
   ·分子生物学检测第29-30页
 7 植物病毒侵染性cDNA克隆及应用第30-35页
   ·侵染性cDNA的类型第30-31页
     ·侵染性的cDNA第30-31页
     ·cDNA的具有侵染性的体外转录产物第31页
   ·侵染性cDNA克隆的应用第31-35页
     ·病毒分子特性研究第31-32页
     ·植物表达载体第32页
     ·基因沉默载体第32-35页
 8 研究目的和意义第35-36页
第二章 PNRSV中国分离物的遗传多样性研究和基因组型鉴定第36-48页
 1 材料与方法第36-41页
   ·材料第36-37页
     ·样品来源第36页
     ·引物设计与合成第36-37页
   ·RT-PCR第37-38页
     ·总RNA提取第37页
     ·RT-PCR第37-38页
   ·Integrated-PCR第38页
   ·PCR产物纯化回收第38-39页
   ·cDNA的克隆第39-40页
     ·克隆载体及连接第39页
     ·大肠杆菌感受态的制备第39-40页
     ·连接产物的转化第40页
     ·质粒提纯及序列测定第40页
   ·序列分析第40-41页
 2 结果与分析第41-45页
   ·PNRSV中国分离物的CP基因克隆和测序第41页
   ·PNRSV中国分离物的遗传多样性分析第41-42页
   ·PNRSV不同组群分离物的Integrated-PCR鉴定第42-45页
 3 讨论第45-48页
第三章 PNRSV加拿大分离物的检测和遗传多样性研究第48-61页
 1 材料与方法第48-53页
   ·材料第48-49页
     ·样品来源第48页
     ·引物设计与合成第48-49页
   ·DAS-ELISA第49页
   ·RT-PCR第49-50页
   ·克隆和序列测定第50-51页
   ·序列分析第51-53页
 2 结果与讨论第53-61页
   ·PNRSV的DAS-ELISA和RT-PCR检测第53-54页
   ·PNRSV的基因组RNA3序列分析第54-56页
   ·基于MP和CP基因系统发育进化分析第56-61页
第四章 PNRSV分离物CHR3和PCH12全基因组克隆测序第61-72页
 1 材料与方法第61-65页
   ·材料第61-62页
     ·样品来源第61页
     ·引物设计与合成第61-62页
   ·近基因组全长的RT-PCR扩增第62页
   ·5'-RACE第62-64页
   ·3'-RACE第64-65页
   ·序列分析第65页
 2. 结果与讨论第65-72页
   ·Chr3和Pch12的全基因组序列测序第65-69页
     ·近全基因组序列的克隆第65-66页
     ·5’端序列克隆第66-67页
     ·3’端序列克隆第67-68页
     ·全基因组序列组装第68-69页
   ·Chr3和Pch12基因组结构和序列分析第69-72页
第五章 PNRSV侵染性CDNA克隆的构建及致病相关基因鉴定第72-99页
 1. 材料与方法第72-80页
   ·材料第72-73页
     ·PNRSV分离物Chr3和Pch12第72页
     ·植物材料第72-73页
   ·PNRSV分离物Chr3和Pch12侵染性cDNA克隆构建第73-74页
   ·构建Chr3和Pch12基因组不同区段交换的杂合病毒第74-75页
   ·点突变第75-77页
   ·农杆菌电转感受态制备第77-78页
   ·农杆菌注射接种第78页
   ·基因枪接种第78-79页
   ·DAS-ELISA第79页
   ·RT-PCR和qRT-PCR第79页
   ·P2蛋白的3D结构模型构建第79-80页
 2. 结果与分析第80-95页
   ·Chr3和Pch12侵染性cDNA克隆构建及致病性比较第80-82页
   ·体内病毒积累水平与PNRSV的致病性呈正相关第82-84页
   ·基因组RNA1和RNA2共同决定PNRSV致病性第84-85页
   ·PNRSV致病相关序列定位于RNA1的1C和RNA2的2M区段第85-88页
   ·P2蛋白Lys279和RNA1的1C区段决定Pch12强毒性第88-91页
   ·互补试验证实Pch12的强毒因子可赋予弱毒分离物Chr3强致病性第91-92页
   ·Chr3,Pch12和杂合体Chr3(P2-N279K)的P2蛋白的3D结构特征第92-95页
 3. 讨论第95-99页
第六章 结论与展望第99-104页
 1 李属坏死环斑病毒(PNRSV)的致病机理研究第99-100页
 2 PNRSV的侵染性cDNA克隆及其在果树功能基因组学研究及病毒病害防治中的应用潜能第100-104页
参考文献第104-118页
附录A 常用溶液配方第118-119页
附录B 本研究所克隆PNRSV分离物序列在GENBANK数据库中的收录号第119-120页
附录C 研究生期间已(待)发表文章第120-121页
附录D 研究生期间参加学术会议及会议摘要第121-122页
致谢第122-123页

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