| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-18页 |
| 第一部分 酵母谷胱甘肽转移酶Gtt2 的结构与功能研究 | 第18-64页 |
| 第一章 谷胱甘肽转移酶的研究背景 | 第18-28页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·谷胱甘肽转移酶及其生化机理 | 第18-28页 |
| ·谷胱甘肽转移酶的概述 | 第18-20页 |
| ·谷胱甘肽转移酶的同源结构及底物结合位点 | 第20-25页 |
| ·谷胱甘肽转移酶的催化机理 | 第25-26页 |
| ·酿酒酵母中的谷胱甘肽转移酶 | 第26-28页 |
| 第二章 实验材料、设备与方法 | 第28-40页 |
| ·实验材料与设备 | 第28-29页 |
| ·菌株、质粒 | 第28页 |
| ·试剂、酶 | 第28页 |
| ·仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-34页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第34-35页 |
| ·圆二色谱（Circular Dichroism，CD）分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质结晶以及数据收集 | 第36-38页 |
| ·晶体结构解析和精修 | 第38页 |
| ·Gtt2 野生型及突变体的活性检测 | 第38-39页 |
| ·Gtt2 结合的谷胱甘肽的pKa 值测定 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第40-59页 |
| ·Gtt2 的纯化 | 第40-42页 |
| ·Gtt2 的N 端信号肽 | 第40页 |
| ·Gtt2 蛋白的表达与纯化 | 第40-42页 |
| ·野生型Gtt2 及其突变体的圆二色谱实验结果 | 第42-43页 |
| ·Gtt2 的晶体学研究 | 第43-49页 |
| ·Gtt2 晶体的生长与优化 | 第43页 |
| ·Gtt2 衍射数据的收集与处理以及晶体结构的解析 | 第43-45页 |
| ·Gtt2 结构模型的质量评估 | 第45-49页 |
| ·Gtt2 的晶体结构与活性位点 | 第49-51页 |
| ·Gtt2 的总体结构 | 第49-50页 |
| ·Gtt2 的活性位点 | 第50-51页 |
| ·Gtt2：一种新的催化类型的谷胱甘肽转移酶 | 第51-56页 |
| ·激活谷胱甘肽的因子的确定 | 第51-54页 |
| ·检验传统的催化残基对Gtt2 的作用 | 第54页 |
| ·Gly27 的重要作用 | 第54-56页 |
| ·Gtt2 催化机理的模型 | 第56页 |
| ·非典型性谷胱甘肽转移酶的多序列比对分析 | 第56-59页 |
| 本篇小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 第二部分 酵母甲硫氨酸亚砜还原酶Mxr1 结构与功能研究 | 第64-112页 |
| 第四章 甲硫氨酸亚砜还原酶的研究背景 | 第64-74页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶及其反应机制 | 第64-74页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶的概述 | 第64-66页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶MsrA 的同源结构及底物结合位点 | 第66-70页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶MsrA 的催化机理 | 第70-71页 |
| ·甲硫氨酸亚砜还原酶MsrA 的再生机制 | 第71-72页 |
| ·酿酒酵母中的甲硫氨酸亚砜还原酶 | 第72-74页 |
| 第五章 实验材料、设备与方法 | 第74-84页 |
| ·实验材料与设备 | 第74-75页 |
| ·菌株、质粒 | 第74页 |
| ·试剂、酶 | 第74页 |
| ·仪器设备 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-84页 |
| ·重组质粒的构建 | 第75-78页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第78-79页 |
| ·参与Mxr1-Trx2 复合物形成的半胱氨酸分析 | 第79-80页 |
| ·Mxr1-Trx2 复合物的制备 | 第80-81页 |
| ·蛋白质结晶以及数据收集 | 第81页 |
| ·晶体结构解析和精修 | 第81-84页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第84-107页 |
| ·Mxr1 和Trx2 的纯化 | 第84-87页 |
| ·Mxr1 的纯化 | 第84-86页 |
| ·Trx2C34S的纯化 | 第86-87页 |
| ·Mxr1-Trx2 复合物的纯化 | 第87-88页 |
| ·Mxr1 与Mxr1-Trx2 的晶体学研究 | 第88-95页 |
| ·Mxr1 与Mxr1-Trx2 晶体的生长与优化 | 第88-89页 |
| ·Mxr1 相关晶体衍射数据的收集、处理、结构解析 | 第89-91页 |
| ·Mxr1 结构模型的质量评估 | 第91-95页 |
| ·Mxr1 与Trx2 参与复合物形成半胱氨酸的鉴定 | 第95-97页 |
| ·还原态Mxr1 的晶体结构 | 第97-98页 |
| ·氧化态Mxr1 的晶体结构 | 第98-100页 |
| ·Mxr1 氧化态单体的结构 | 第98-99页 |
| ·Mxr1 氧化态二体的结构 | 第99-100页 |
| ·Mxr1-Trx2 复合物的晶体结构 | 第100-104页 |
| ·Mxr1-Trx2 的总体结构 | 第100-102页 |
| ·Mxr1-Trx2 的相互作用界面 | 第102-104页 |
| ·从Mxr1 的可塑性看MsrA 与MsrB 家族的底物多样性 | 第104-105页 |
| ·从Trx 底物蛋白的可塑性看Trx 底物蛋白的多样性 | 第105-107页 |
| 本篇小结 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-112页 |
| 第三部分 其他工作 | 第112-122页 |
| 第七章 其他Trx 底物蛋白与Trx 的复合物研究 | 第112-118页 |
| ·引言 | 第112页 |
| ·背景介绍、实验结果与讨论 | 第112-118页 |
| ·Tsa1 及Tsa1-Trx2 的背景介绍、实验结果与讨论 | 第112-114页 |
| ·Tsa2 及Tsa2-Trx2 的背景介绍、实验结果与讨论 | 第114-115页 |
| ·Met16 及Met16-Trx2 的背景介绍、实验结果与讨论 | 第115-116页 |
| ·Gpx3 及Gpx3-Trx2 的背景介绍、实验结果与讨论 | 第116-118页 |
| 第八章 参与合作的其他工作 | 第118-119页 |
| ·概述 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-122页 |
| 附录 | 第122-126页 |
| A：pET28b 与pET29b 的载体改造 | 第122页 |
| B：引物设计规则 | 第122-123页 |
| C：大肠杆菌感受态的制备 | 第123页 |
| D：聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）的实验流程 | 第123-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第127-129页 |
