| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一部分 酿酒酵母线粒体基质蛋白 Mmf1 的结构与功能研究 | 第13-57页 |
| 第一章 研究背景 | 第13-31页 |
| ·引言 | 第13-17页 |
| ·YER057c/Yjgf/Uk114 基因家族的特点和成员 | 第13-15页 |
| ·线粒体与氧化还原平衡 | 第15-17页 |
| ·Mmf1 蛋白及功能简介 | 第17-22页 |
| ·Mmf1 蛋白简介 | 第17-18页 |
| ·Mmf1 的功能研究现状 | 第18-22页 |
| ·Mmf1 与其同源蛋白的比较分析 | 第22-28页 |
| ·YER057c/Yjgf/Uk114 家族蛋白的结构 | 第22-23页 |
| ·YER057c/Yjgf/Uk114 家族蛋白的功能 | 第23-26页 |
| ·酿酒酵母中Mmf1 和物种内同源蛋白Hmf1 的比较 | 第26-27页 |
| ·裂殖酵母中Mmf1 的同源蛋白 | 第27-28页 |
| ·与Mmf1 有相互作用的蛋白质 | 第28-30页 |
| ·本课题的研究目标和内容 | 第30-31页 |
| 第二章 实验材料、设备与方法 | 第31-41页 |
| ·实验材料和实验设备 | 第31-32页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第31页 |
| ·实验试剂与酶 | 第31-32页 |
| ·实验仪器设备 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-41页 |
| ·目的基因的重组克隆质粒构建 | 第32-37页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第37-39页 |
| ·蛋白质的晶体生长 | 第39-40页 |
| ·晶体结构解析方法 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第41-57页 |
| ·Mmf1 的表达与纯化 | 第41-46页 |
| ·Mmf1 的引物设计 | 第41-42页 |
| ·Mmf1 的质粒构建过程 | 第42-43页 |
| ·Mmf1 蛋白的检测表达 | 第43页 |
| ·Mmf1 蛋白的纯化和浓缩 | 第43-46页 |
| ·Mmf1 蛋白的初步晶体学研究 | 第46-47页 |
| ·Mmf1 蛋白晶体的生长与优化 | 第46页 |
| ·Mmf1 蛋白衍射数据的收集与处理 | 第46-47页 |
| ·晶体结构的解析与数据质量分析 | 第47-48页 |
| ·晶体结构解析 | 第47-48页 |
| ·晶体质量的评估 | 第48页 |
| ·Mmf1 的结构描述 | 第48-54页 |
| ·Mmf1 单体和三聚体晶体结构分析 | 第48-50页 |
| ·Mmf1 三聚体表面电势的分析 | 第50-52页 |
| ·Mmf1 蛋白中保守氨基酸 | 第52页 |
| ·Mmf1 可能的六聚体现象 | 第52-54页 |
| ·研究展望 | 第54-56页 |
| 本章总结 | 第56-57页 |
| 第二部分：酿酒酵母线粒体基质蛋白 Mam33 的结构及与 Mmf1 相互作用的研究 | 第57-97页 |
| 第四章 背景介绍 | 第57-71页 |
| ·引言 | 第57-58页 |
| ·线粒体 | 第57页 |
| ·线粒体氧化磷酸化 | 第57-58页 |
| ·Mam33 蛋白的研究简介 | 第58-62页 |
| ·Mam33 的发现 | 第58页 |
| ·Mam33 的基本特性 | 第58-60页 |
| ·Mam33 蛋白的功能研究进展 | 第60-62页 |
| ·Mam33 的同源蛋白 | 第62-68页 |
| ·Mam33 同源蛋白简介 | 第62-64页 |
| ·Mam33 同源蛋白的结构 | 第64-66页 |
| ·Mam33 同源蛋白的功能 | 第66-68页 |
| ·与 Mam33 相互作用的蛋白质 | 第68-69页 |
| ·本课题的研究目标和内容 | 第69-71页 |
| 第五章 实验材料、设备与方法 | 第71-79页 |
| ·实验材料和设备 | 第71页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第71页 |
| ·实验试剂与酶 | 第71页 |
| ·实验仪器设备 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-79页 |
| ·Mam33 蛋白的表达，纯化，结晶以及结构解析 | 第71-73页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第73-75页 |
| ·蛋白质的晶体生长 | 第75页 |
| ·晶体结构解析方法 | 第75页 |
| ·Mam33 蛋白与Mmf1 蛋白的分子筛共纯化实验 | 第75-76页 |
| ·Mam33 蛋白与Mmf1 蛋白的分子筛共结晶实验 | 第76页 |
| ·Mam33 蛋白与Mmf1 蛋白的等温滴定实验 | 第76-77页 |
| ·Mam33 蛋白与Mmf1 蛋白的共超离实验 | 第77-79页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第79-97页 |
| ·Mam33 蛋白的表达，纯化和晶体生长 | 第79-83页 |
| ·Mam33 的引物设计 | 第79-80页 |
| ·Mam33 的质粒构建过程 | 第80-81页 |
| ·Mam33 蛋白的检测表达 | 第81页 |
| ·Mam33 蛋白的纯化和浓缩 | 第81-83页 |
| ·Mam33 蛋白质的浓缩和浓度测定 | 第83页 |
| ·Mam33 蛋白与 Mmf1 蛋白的分子筛共纯化实验 | 第83-84页 |
| ·Mmf1 蛋白的初步晶体学研究 | 第84-85页 |
| ·Mmf1 蛋白晶体的生长与优化 | 第84-85页 |
| ·Mam33 蛋白衍射数据的收集与处理 | 第85页 |
| ·Mam33 蛋白衍射数据的收集与处理 | 第85页 |
| ·晶体结构的解析与数据质量分析 | 第85-86页 |
| ·Mam33 蛋白的三维晶体结构 | 第86-90页 |
| ·Mam33 晶体的单体和三聚体结构分析 | 第86-88页 |
| ·Mam33 三聚体表面电势的分析 | 第88-89页 |
| ·Mmf1 与Mam33 共结晶之路 | 第89-90页 |
| ·Mam33 蛋白与Mmf1 蛋白的分子筛共纯化讨论 | 第90-91页 |
| ·等温滴定实验结果讨论 | 第91-92页 |
| ·超速离心实验结果讨论 | 第92-93页 |
| ·Mmf1 蛋白与Mam33 蛋白相互作用模式图 | 第93-95页 |
| ·研究展望 | 第95-96页 |
| 本章总结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| A. 载体图谱 | 第103-105页 |
| B. 大肠杆菌感受态细胞制备方法 | 第105-106页 |
| C. 毕赤酵母感受态细胞制备方法 | 第106-107页 |
| D.亲和层析以及分子筛层析原理 | 第107页 |
| E. 培养基的配制 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第110-111页 |
